1.細菌培養
所有標本均應作革蘭染色和需氧培養，厭氧培養應置于特殊的培養基，孵育48～72小時，然后檢查。可能初次培養后大于1周還得不到易感性資料。
2.標本涂片檢查
在對標本作厭氧菌培養的同時進行涂片鏡檢，可早期把有厭氧菌生長的信息提供給臨床，如普通需氧培養無細菌生長，但直接涂片見到大量細菌者，即可考慮為厭氧菌感染；如普通培養只有一種細菌生長但直接涂片可見兩種或以上細菌者，可考慮患者為混合感染。
3.厭氧菌藥敏試驗
厭氧菌藥敏試驗應該是嚴格的，需經國家臨床檢驗標準指導委員會確認，但若菌種是已知的，則藥敏情況可預先推測，因此很多實驗室不作常規的厭氧菌藥敏試驗。
4.細菌染色
若感染部位的膿液革蘭染色顯示出混合的多形性菌群，則可考慮厭氧菌感染。由于革蘭染色很難發現擬桿菌，故必須仔細觀察特征性的變化不一的絲狀桿菌。若感染部位取材作革蘭染色顯示為混合菌群，而明顯壞死的組織培養僅見α-溶血性鏈球菌或單一的需氧菌如大腸桿菌，或甚至無細菌生長，則應考慮到可能是標本的運送或培養的細菌學技術不當之故。