甲基紅試驗是根據腸桿菌科各菌屬都能發酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，可使培養基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅這個原理進行的測驗。
正常值
甲基紅的變色范圍是PH4.4-6.2，意思是說:
1.其pH值在4.4-6.2區間時，呈橙色。
2.其pH值<=4.4時，呈紅色，因是靠近酸性強的一邊時的顏色，故又稱之為酸色。
3.其pH值>=6.2時，呈黃色，因是靠近堿性強的一邊時的顏色，故又稱之為堿色。