關于細菌感染的檢查介紹

　　一，病原菌檢測

　　（一）標本 標本的采集與送檢原則

　　⒈區別取材： 根據不同病原菌在機體內的分布和排出部位，采取不同的標本.盡量采取病變明顯部位的材料.

　　⒉嚴格無菌操作，避免標本被污染：無菌取材，防止雜菌污染.

　　⒊妥善處理：標本采集應在使用抗菌藥物之前.

　　⒋盡快送檢：標本必須新鮮，采集后盡快送檢.多數菌可冷藏運送，糞便標本應加甘油緩沖鹽水保存液.

　　⒌作好標記，祥填化驗單.

　　（二）細菌形態與結構檢查

　　⒈顯微鏡放大法

　　細菌微小，肉眼不能直接看到，通常用光學顯微鏡油鏡頭，放大1000倍左右觀察細菌的形態，而細菌的內部超微結構，則須用電子顯微鏡放大數萬倍方能觀察.

　　⒉染色法.

　　⑴ 單染色法 用單一染料染色，可以觀察細菌的大小，形態和排列特點，但不能鑒別細菌.

　　⑵復染色法 用兩種以上的不同染料染色，可將不同細菌染成不同顏色，除可觀察細菌的形態特征外，還能鑒別細菌.最常用的有

　　革蘭染色法

　　方 法細菌涂片經火焰固定后，先用結晶紫初染1分鐘，再加碘液媒染1分鐘，然后用95%的酒精脫色30秒，最后以稀釋復紅復染30秒.

　　結 果 菌體呈紫色的為革蘭陽性菌，呈紅色的為革蘭陰性菌.

　　原 理 主要由于 G+菌與 G-菌細胞壁結構不同；其次G+菌等電點（pI2~3）比

　　G-菌（pI4~5）低，故G+菌與堿性染料的結合力強于G-菌.

　　實際意義 可鑒別細菌，選擇使用抗生素，研究細菌致病性.

　　細菌染色法中還有抗酸染色和莢膜，芽胞，鞭毛，細胞壁，核質等特殊染色法.

　　⒊分離和鑒定 是確診細菌性感染最可靠的方法.

　　鑒定的主要內容有：

　　⑴培養特性 標本接種于培養基，以獲得純培養.根據細菌所需營養,生長條件，菌落特征做初步鑒別.

　　⑵形態特征 通過分離培養，對菌落或純培養物，經涂片染色后鏡檢，根據細菌的形態，排列，大小，染色性和特殊結構等做初步鑒別.

　　⑶生化反應 不同的病原菌有不同的酶系統，代謝產物也不盡相同，因而有助于鑒別細菌.

　　⑷血清學鑒定 用含已知特異性抗體的診斷血清與分離培養出的未知純種菌作玻片凝集試驗，以確定病原菌的種或型.也可用免疫熒光，協同凝集試驗，對流免疫電泳，放射免疫，酶免疫等快速，敏感的方法，從標本中直接檢測特異抗原，有助確定病因.

　　⑸動物試驗 主要用于分離，鑒定病原菌，測定菌株產毒性等，常用實驗動物有小白鼠，豚鼠和家兔.

　　⑹藥物敏感試驗 對指導臨床選擇用藥，及時控制感染有重要意義.常用的方法為單片紙碟法和試管稀釋法.

　　⒋ 病原菌抗原的檢測 用已知特異性抗體測未知抗原.其優點：快速，靈敏，特異性高.常用的免疫技術有

　　⑴沉淀反應：

　　⑵協同凝集試驗：

　　⑶免疫熒光法（IF)；

　　⑷對流免疫電泳（CIE):

　　⑸酶免疫測定（EIA)

　　⑹免疫印記技術

　　⒌其他檢測法

　　⑴氣-液相色譜法 常用于厭氧菌的檢測.

　　⑵基因診斷法 不同種的細菌有不同的基因或堿基序列，通過檢測微生物的特異基因序列是否存在的診斷方法，稱為微生物的基因診斷.常用的有核酸雜交，PCR和DNA指紋圖譜等.

　　[核酸雜交] 可從標本中直接檢出病原體核酸，對不能或難分離培養的病原體尤為適用.

　　原理：應用已知序列的核酸單鏈作為探針，在一定條件下按照堿基互補規律，與經處理的標本中未知的單鏈核酸雜交，通過放射自顯影,得知是否有特異序列與已知探針結合.

　　方法：有液相與固相之分，固相較常用，有原位雜交，斑點雜交，Southern印跡，Northern印跡等.

　　[PCR技術] 是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的無細胞分子克隆技術.具快速，特異性強和敏感性極高等特點.

　　[DNA指紋] 主要用于流行病學調查等方面的研究.包括細菌染色體DNA和質粒DNA指紋圖譜.