細菌黏附是一個非常復雜的細菌與宿主細胞相互作用的過程。細菌表面的黏附素與宿主細胞表面的相應受體結合之后，細菌便能牢固地黏附于宿主細胞上，并在該局部組織定居，大量繁殖。而腸道菌群在宿主腸道中的定植就是通過細菌的黏附性來實現的。因此，益生菌能否黏附于宿主腸道黏膜細胞表面形成穩定的優勢菌群是發揮其眾多生理功能的必要前提，而不能黏附于腸道黏膜細胞的細菌只能是過路菌而無法充分發揮其生理功能。 [1]
羅伊氏乳桿菌是人和動物胃腸道中天然存在的乳桿菌之一，可承受胃酸和膽汁的作用而到達小腸的上部并黏附于小腸壁。對該菌黏附及定植能力的研究表明，羅伊氏乳桿菌細胞外存在黏附素，使其對宿主的黏膜黏液以及腸黏膜上皮細胞均表現較強的黏附能力。 [1]
黏附素為乳酸菌表面普遍存在的結構成分，其主要成分多為分泌蛋白、糖蛋白、黏多糖類物質等。Miyoshi等用Caco-2細胞進行體外黏附模擬實驗，證明羅伊氏乳桿菌104R存在一種表面蛋白MapA，其不僅參與黏膜黏液的黏附，而且同時參與腸上皮細胞的黏附。Roos和Jonsson研究表明羅伊氏乳桿菌1063可以編碼一種358kDa的蛋白質，這種蛋白質可促進羅伊氏乳桿菌與黏膜黏液的黏附，而不同株羅伊氏乳桿菌是否能編碼這種蛋白質對于該菌株與黏膜黏液的粘附強弱具有非常重要的作用。 [1]
羅伊氏乳桿菌在腸道中的定植具有普遍性，還沒有研究證明其定植位點具有特異的選擇性，即無論對腸黏膜黏液，還是腸上皮細胞等多部位的體內實驗及體外實驗的Caco-2細胞系都可以檢測到羅伊士乳桿菌的定植。Bjorkman的研究表明羅伊氏乳桿菌也可黏附在人結腸的上皮細胞。Jacobsen等選擇47株乳酸桿菌通過設定特定篩選條件:pH2．5，膽鹽濃度0．3%，對Caco-2細胞的黏附及是否抑制腸道致病菌而不抑制正常菌群等條件，從中篩選理想的益生菌。他們的研究結果顯示只有5株符合以上條件，其中三株可以在人體中很好地定植，這三株中就包括羅伊氏乳桿菌，而且羅伊氏乳桿菌是這三株中唯一既具有很強的抑制病原微生物的能力又不會對腸道中正常菌群造成抑制的乳酸桿菌。 [1]
另外，某些羅伊氏乳桿菌不僅可以黏附定植于腸道中，而且其菌體還可以分泌胞外物質抑制腸道致病菌的黏附定植。羅伊氏乳桿菌104R可以黏附于豬回腸的黏液層，而且還能分泌一種大小為1700kDa的胞外物質抑制產腸毒素大腸桿菌K88的生長定植。