1、發作時血糖<2.8mmol/L（50mg/dl）。
2、血清胰島素和C肽：低血糖時的血漿胰島素及C肽增高，胰島素指數（胰島素/血糖）>0.3，如>1.0可肯定診斷。空腹血漿胰島素>200uU/ml可肯定診斷。
3、口服糖耐量試驗：典型者呈低平曲線，部分可糖耐量降低，少數呈早期低血糖或正常糖耐量曲線。
4、饑餓試驗：陽性有助診斷。空腹血糖>2.8mmol/L者方可試驗。90%以上禁食24－36h可激發低血糖。少數需禁食48－72h，并于終止禁食前2h加運動，可激發低血糖。
5、常規X線：胃泌素瘤者消化道鎖餐遺容可顯示胃及十二指腸多發、反復發作的潰瘍。
6、超聲表現：胰島β細胞瘤病變在胰腺邊緣或胰腺內，圓形或橢圓形，腫塊內呈低回聲，邊緣清楚。惡性胰島細胞瘤邊界不規則，內部回聲不均勻。
7、CT表現：
（1）平掃胰腺內等密度腫塊，多較小，可包括埋在胰腺內或局部突出于胰腺表面。
（2）由于功能性胰島細胞瘤無論良、惡性均為多血管性、富血供腫瘤，所以增強掃描早期（肝動脈期）腫塊顯著強化呈高密度結節，高于周圍正常胰腺。
（3）非功能性腫瘤通常較大，密度均勻或不均勻，多發于胰體、尾部，約20%出現瘤體內鈣化，增強后可有強化，密度稍高于正常胰腺，中心可出現囊變。
（4）若合并局部淋巴結腫大或鄰近器官受累或轉移，為惡性腫瘤征象。
8、血管造影：實質期腫瘤密度持續增高，并可見邊緣清楚的腫瘤染色，是為特征性表現。