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  • 發布時間:2024-08-23 16:15 原文鏈接: 關于膀胱生物反應器的基本介紹

      膀胱反應器有著和乳腺反應器一樣的優點:收集產物蛋白比較容易,不必對動物造成傷害。此外,該系統可從動物一出生就收集產物,不論動物的性別和是否正處于生殖期。膀胱生物反應器最顯著的優勢在于從尿中提取蛋白質比在乳汁中提取簡便、高效。

      膀胱生物反應器多用Uroplakin啟動子啟動人生長激素(hGH)的表達,產生 hGH特異性的高豐度RNA,這些RNA與蛋白分泌量高度相關。Uroplakin基因在多種哺乳動物體內有很高的保守性,如鼠、兔、牛、羊和人等。

      生長激素 Kerr等[12]將pUPII-LacI用質粒的Kpn i進行消化,用T4DNA多聚酶切去3'端,然后用BamHI消化,分離出3.6kb的5'端小鼠UPII基因片段,此片段含有膀胱反應器特異性表達所需的大部分序列。將此片段與位于無啟動子的pOGH質粒純化SaI和BamHI位點間的hGH結構基因的5'端連接,得到pUPII-hGH質粒,能表達該質粒的組織分布有限。將得到的pUPII -hGH質粒用HindIII和EcoRI消化,得出一段5.7kb的UPII-hGH融合基因可用于顯微注射,在膀胱上皮細胞中合成hGH,收集轉基因動物尿液,從中提取重組蛋白。但在這一途徑中轉基因動物會因hGH的作用逐漸肥胖,并導致雌性動物不育癥。乳腺生物反應器也能表達hGH。用同源重組方法將hGH基因導入210kb的人α-乳球蛋白位置依賴性YAC載體,將重組的YAC dNA顯微注入大鼠胚胎,轉基因大鼠的乳汁中含有高水平的hGH,含量可達0.25~8.9mg/ml[13]。

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