時間的主要有三個方面的因素:組分性質、固定液及柱條件和儀器操作條件。對于特定的組分和色譜儀器系統以及色譜柱子,前兩個方面的因素通常是不變的,容易調整的則只有操作條件,如:載氣壓力、流速、柱溫等。
對于特定的目標組分,方法柱前壓為p1時,保留時間為,在其它影響因素不變的條件下,在p1的某個范圍內選擇6個壓力條件重復試驗,可獲得包括p1在內的7組壓力—保留時間數據。繪制p-tR曲線(必要時進行曲線回歸,得到一定范圍內的曲線方程)。上述過程稱作鎖定。當該方法在另一臺機器上應用時,首先用原方法的柱前壓p1進行預分析,此時,目標組分的保留時間可能為tR2(tR2可能等于、小于或大于tR1),由p1和tR2確定的新點很可能不在原來的p-tR曲線上。即當前機器的p-tR曲線發生了移動。移動的距離可以通過點(p1,
tR1)和點(p1,
tR2)之間的相對距離確定,這樣可以獲得新的p-tR曲線(虛線)。利用新的p-tR曲線計算可以得到欲使目標組分在當前儀器上的保留時間亦為tR1所需要的柱前壓為p2。于是,只要將柱前壓由p1調整到p2就可以保持目標組分的保留時間為tR1。如果保留時間重現性仍未達到要求,可重復上述過程進行微調。這就是保留時間鎖定的第二步,稱作重新鎖定。
目前,在某些化學工作站中軟件中已有此項功能。當一個分析方法確定后,首先進行一次鎖定。用戶可將7個(或5個)壓力下的目標化合物的保留時間數據輸入軟件,軟件計算出p-tR曲線,并同方法一起存儲。當在另一臺機器上重復該方法時,只要將原方法調入,試運行一次就可進行重新鎖定。軟件根據運行的結果控制電子壓力系統調整柱前壓,使得當前系統的目標組分的保留時間與原方法中的保留時間匹配。
另外,保留時間鎖定功能的實現要求色譜儀器具有高精度的壓力、流量和溫度控制系統。尤其是對壓力和流量要求有電子程序壓力控制系統。要求軟件有控制硬件的功能,因此目前實現該功能的軟件一般都是針對具體的儀器開發的,尚缺乏通乏通用性。
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