需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通瓊脂培養基上即可生長。最適生長溫度為37℃，最適宜pH值為7.4。在20%的CO2環境中有利于毒素產生。在肉湯培養基中經37℃培養18～24h，呈均勻混濁生長，管底稍有沉淀。在普通瓊脂平板上形成圓形、凸起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、不透明的菌落，直徑2～3 mm。屬內不同菌種因產生金黃色、白色或檸檬色等脂溶性色素而使菌落著色。致病菌株在血平板上生長后，在菌落周圍可見完全透明溶血環（β溶血）。該菌耐鹽性強，在含10%-20%氯化鈉培養基中仍能生長，故可用高鹽培養基分離葡萄球菌。
觸酶試驗陽性。多數葡萄球菌能分解葡萄糖、麥芽糖和蔗糖產酸不產氣。致病菌株能分解甘露醇，血漿凝固酶試驗多為陽性。