不同病型采取不同檢材如膿汁、血液、可疑食物、嘔吐物及糞便等。
1.直接涂片鏡檢
取標本涂片，革蘭氏染色后鏡檢，根據細菌形態，排列和染色性可作出初步診斷 。
2.分離培養與鑒定
將標本接種于血瓊脂平板，甘露醇和高鹽培養基中進行分離培養，根根菌落特征、色素形成，有無溶血、菌落涂片染色鏡檢和血漿凝固酶試驗，進行鑒定。
葡萄球菌腸毒素檢測傳統方法進行動物試驗，取呵疑污染食物，患者嘔吐物、糞便等，分離培養，鑒定后挑取單個菌落肉湯增菌，取上清濾液腹腔注射至6-8周齡幼貓，注射4h后動物出現嘔吐、腹瀉，體溫升高或死亡．提示有腸毒素存在可能。近年來，多采用免疫學方法如ELISA法微量檢測腸毒素，快速敏感；也可用分子生物學方法如基因探針、PCR等技術檢測產腸毒素菌株．但要防止假陽性出現。