檢測概要
由于IEF法需大型設備，工作量較大，極大地限制了該法的臨床應用。免疫印跡法為檢測ApoE表型最常用方法。此法直接用血清（或血漿）作為樣品，脫脂后進行IEF電泳，然后用特異性多克隆或單克隆抗體進行免疫印跡反應，根據黑色后圖譜即可確定ApoE表型。此法比IEF法更省時、簡便、準確。
儀器與試劑
電泳儀，垂直板式電泳槽，轉移電泳槽，NC膜；主要試劑有：⑴3：1（V/V）乙醚脫脂液；⑵樣品溶解液；0.01mol/L Tris,pH8.6,內含0.01mol/LDTT,8mol/L尿素；⑶兩性電解質（Ampholine,pH4～6,LKB產品）；⑷丙烯酰胺（Acr）、N-N'甲叉雙丙烯酰胺（Bis），Serva產品；⑸TEMED（Sigma產品）；⑹電泳緩沖液：1mol/L NaOH,1mol/L H3PO4；⑺轉移電泳緩沖液：含20%甲醇，39mmol/L甘氨酸，48mmol/L Tris和0.0375%SDS；⑻洗滌液（TPBS）含0.05%吐溫-20，0.9%NaCl的10mmol/LPBS,pH7.4；⑼封閉液：含0.18%兔血清的TPBS或含3%BSA的TPBS；⑽羊抗人ApoE多克隆抗血清；⑾HRP標記的兔抗羊IgG：⑿4-氯-1-萘酚（Sigma產品）。
實驗方法
（1）樣品處理：抽取空腹血1～2ml，分離血清。取血清10μ置于預冷乙醇/乙醚（3：1）脫脂液中-20℃脫10h以上，離心（2500r/min）15min，棄上清后的加等量預冷的無水乙醚繼續脫脂0.5h，再次離心，將沉淀樣品用氮氣吹干或抽真空使殘余乙醚揮發；（2）IEF電泳：電泳前將樣本溶解在100μl溶解液中（0.01mol/L Tris,pH8.6,內含0.01mol/LDTT,8mol/L尿素），放置37℃，1h。PAG凝膠濃度為5%，內含尿素（8mol/L），2%Ampholine,0.025%過硫酸胺（AP）及0.033%TEMED。電極液：陰極為1mol/LNaOH，陽極為1mol/LH3PO4。每份樣品加樣20μl，IEF條件初為300V，0.5h,然后調至700V，電泳5h。或1000V預冰30min（10℃）后，關電源，在靠陰極處放上IEF加樣箔，每一空內加樣后，繼續電泳2h30min；（3）免疫印跡：轉移電泳條件18V/cm，按轉移電泳槽要求將凝膠上的蛋白電泳轉移到NC膜上。5h后取出NC膜，放入封閉液內，室溫過夜。用TPBS洗3次，然后用羊抗人ApoE抗血清（1：2000TPBS稀釋）室溫孵育6h。傾去液體，充分洗滌后，加入HRP標記的兔抗羊IgG（1：200）室溫孵育2h。用PBS洗膜3次，每次10min。稱取12mg4-氯-1-萘酚溶在4ml冷甲醇（-20℃）中，放入20mlPBS，加入10μ130%H2O2，放入已洗凈的NC膜，緩緩搖動至蛋白帶顯出，蒸餾水洗后，晾干，暗處保存。