連接酶（英語：Ligase，或稱連結酶和結合酶）是一種催化兩種大型分子以一種新的化學鍵結合一起的酶，一般會涉及水解其中一個分子的團。
又稱合成酶，能催化兩個分子連接成一個分子或把一個分子的首尾相連接的酶。此反應與ATP的分解反應相偶聯。在把兩分子相連接的同時發生三磷酸腺苷（ATP)的高能磷酸鍵的斷裂如DNA連接酶等。
連接酶是酶分類中重要的一類(EC 6):6.1形成C-O鍵；6.2形成C-S鍵；6.3形成C-N鍵；6.4 形成C-C鍵。
連接酶的催化反應過程需要Mg離子
