由于酶免疫測定無需特殊儀器和試劑，且操作簡便，利于普及。因此，在免疫標記技術中，該法應用最為廣泛，并在原有方法基礎上加以改良，使得眾多新的，更敏感的方法應運而生。
①生物素-親和素放大系統(biotin-avidin system，BAS)，建立于70年代后期，通過將酶標記在生物素或親和素上，借助生物素與親和素的高度親力和生物素能與抗體結合的特點應用于ELISA，顯著提高了檢測的敏感性。
②雙表位ELISA(two-site ELISA)，其方法同雙抗體夾心法，只是將包被的抗體和酶標抗體換成針對兩個不同抗原決定簇的單抗，用于檢測單抗的親和性及表位特異性，亦可用于標本中抗原的快速檢測，即在試驗時可將待測抗原與酶標單抗同時加入反應體系，減少檢測步驟。
③斑點免疫滲濾試驗(dot immunofiltration assay，DIFA)，其原理與ELISA相同，但以微孔膜(如硝酸纖維素膜、尼龍膜等)代替聚苯乙烯板作載體。試驗時，將包被有抗原或抗體的微孔濾膜貼置于吸水材料上，依次滴加的標本、酶結合物、底物，分別進行洗滌，多余的標本和酶標抗體及洗滌液等可滲濾入吸水材料中，最后陽性標本在膜上呈現著色斑點。
④酶聯免疫電轉移印漬法(enzyme linked immunoelectrotransferblot，ELIB)，該法將免疫轉印技術與酶標技術相結合，有利于分析和檢測更加復雜的抗原成分。ELIB分三階段進行。第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，先將抗原分成不同的區帶(肉眼不可見)；第二階段為轉移電泳，即將凝膠上的電泳區帶經電泳轉移至硝酸纖維素膜上；第三階段為酶免疫定位，用特異性抗體和酶標抗抗體作間接ELISA，結果陽性區帶呈顯色反應。