(1)定性及效價滴定：用特異性抗原(或抗體)同酶標記抗體(或抗免疫球蛋白抗體)作雙向瓊脂擴散試驗或免疫電泳試驗。然后用酶的底物使沉淀弧顯色，可初步鑒定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式實驗系統里)對酶結合物進行滴定( 見本節 (三)工作濃度的選擇)。
(2)定量和克分子比值測定：可用分光光度計測定(光程1cm)。
酶量(mg/ml)=OD403nm×0.4
IgG量(mg/ml)=OD280nm-OD403nm×0.42)×0.94×0.62
酶量(mg/ml)
IgG量(mg/ml)
酶量
克分子比值=──────── ÷ ─────── = ─── × 4
40,000
160,000
IgG量
(3)本法標記步驟比較簡單，重復性好。缺點是酶的利用率低，一般只有2～4%的酶與蛋白質結合。