酸堿度 取本品，加水制成每1ml 中含30mg的溶液，依法測定，pH值應為5.0 ～7.5 。
溶液的澄清度與顏色 取本品5 份，各0.3g，分別加水5ml使溶解，溶液應澄清無色；
如顯渾濁，與 1號濁度標準液比較，均不得更濃；如顯色，與黃色或黃綠色1號標準比色液比較，均不得更深。
吸收度 取本品，加水制成每1ml 中含1.80mg的溶液，照分光光度法，在280nm 的波長處測定吸收度，不得大于0.10；在264nm 的波長處有最大吸收，吸收度應為0.80～0.88。
水分 取本品，照水分測定法測定，含水分不得過0.5 %。
細菌內毒素 取本品，依法檢查，每100青霉素單位中含內毒素的量應小于0.01EU。
無菌 取本品，分別用青霉素酶法滅活后，依法檢查，應符合規定。
含量測定： 取本品約50mg，精密稱定，加水5ml 溶解后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml ，搖勻，放置15分鐘，加1mol/L硝酸溶液5ml ，醋酸鹽緩沖液（pH4.6）20ml 及水20ml，搖勻，照電位滴定法，用鉑電極作為指示電極，汞－硫酸亞汞電極為參比電極，在35～40℃，用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）緩慢滴定（控制滴定過程約為15分鐘），不計第一個等當點，計算第二個等當點時消耗滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg 的總青霉素（按C16H17N2NaO4S 計算）。
另取本品約 0.5g，精密稱定，加水與上述醋酸鹽緩沖液各25ml，振搖使完全溶解，在室溫下，立即用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）滴定。滴定終點判斷方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg 降解物（按C16H17N2NaO4S 計算）。每1mg的C16H17N2NaO4S相當于1670青霉素單位。