關于鳥槍法的流程介紹

　　１、外源DNA片段的全克隆

　　根據外源DNA片段的末端性質及大小確定克降載體，鳥槍法一般選擇質粒或入-DNA作為克隆載體，受體細胞大多選擇大腸桿菌，只有當后續篩選必須采用外源基因表達產物檢測法時才選擇那些能使外源基因表達的相應受體系統 [1]。

　　２、目的重組子的篩選

　　從眾多的鳥槍法克隆中快速檢出目的重組子的最有效手段是菌落(菌斑)原位雜交法或外源基因產物功能檢測法，前者需要理想的探針，后者則依賴于簡便篩選型的建立。如前所述，若克隆淀粉酶、蛋白或抗生素抗性基因，利用外源基因產物功能檢測法篩選目的重組子是最理想的選擇。在既無探針又難以建立快速篩選模型的情況下，也可采用限制性酶切圖譜法對所獲重組克隆進行分批篩選。例如，已知目的基因位于2.8kb的 ECORI DNA片段中，可用 ECORI分別酶解所有的重組分子，初步確定含2.8kb限制性插入片段的重組克隆，然后再根據目的基因內部的特征性限制性酶切位點進行第二輪酶切篩選，最終找到目的重組子 [1]。

　　３、目的基因的定位

　　在絕大多數情況下，利用鳥槍法獲得的目的重組子只是包含目的基因的DNA片段，必須通過次級克隆在已克隆的DNA片段上準確定位目的基因，然后對目的基因進行序列分析，搜尋其編碼序列以及可能存在的表退染色體DNA調控序列。鳥槍法克隆目的基因的工作量之大是可想而知的，對目的基因及其編碼產物的性質了解得越詳盡，工作量越小 [1]。