真核生物在基因表達時,結構基因中的內含子不能指導蛋白質的合成。所以真核生物的目的基因不能用“鳥槍法”獲得。真核生物基因大都由有編碼功能的序列——外顯子和無編碼功能的序列——內含子,兩者比例為1:4構成。鳥槍克隆法在基因組DNA文庫中篩選到的目的基因,與染色體中的天然基因是一樣的,含有內含子,在結構基因兩端的連接區還有轉錄調控序列片段,即調節基因。這樣的基因可供基因表達的調控分析。因為有內含子的存在,這樣獲得的結構基因不宜在原核宿主組織中表達。所以,要獲得真核生物的目的基因,準確的說要獲得真核生物目的基因的編碼序列,不宜用鳥槍法。
1999年,Yates研究組提出“鳥槍法”(shotgun),其基本技術路線是針對液體或SDS-PAGE條帶的復雜混合物用酶(Trypsin)酶解成肽段混合物,然后對肽混合物進行多維毛細管液相色譜分離......
【摘要】鳥槍法串聯質譜蛋白質鑒定策略由于其高可靠和高效率而被廣泛應用于蛋白質組學研究中,這種方法直接對蛋白質混合物進行酶切,以肽段為鑒定單元,繼而推導真實的樣品蛋白質。由于利用質譜圖推導肽段存在一定的......
摘要蛋白質定量是探索疾病發生發展狀況和尋找新藥靶標的重要手段。在shotgun蛋白組學中,目前常用定量方法包括綜合同位素標記后的質譜峰強度方法和無標記定量方法。根據數據類型無標記定量方法可以分為兩類:......
摘要細胞質膜是細胞中重要的細胞器,在肝功能的發揮中具有非常重要的作用.使用蔗糖密度梯度離心純化細胞質膜,通過電子顯微鏡觀察和免疫印跡法檢驗膜的純度.結果顯示,與組織勻漿成分相比,質膜富集了20倍,線粒......