除臨床癥狀和體征外，患兒的確診主要依靠實驗室檢查。
1. 普通生化： 失鹽型患兒多于新生兒早期出現明顯的高鉀低鈉血癥及低血糖癥，感染、外傷等應急狀態時加重。
2. 特殊檢查： 女性假兩性畸形和男性非GnRH依賴性性早熟都要想到CYP21缺乏癥的可能性，實驗室檢查發現尿17-KS和17-KGS排量增高和（或）血清17-OHP和雄烯二酮水平增高可以確定診斷。 [2]
3. B超：雙側腎上腺肥大。
對于典型病例診斷并不困難，但對于非典型病例應注意與特發性性早熟、腎上腺男性化腫瘤、性腺腫瘤、特發性多毛癥等疾病鑒別。