關于YMC色譜柱的再生

高效液相色譜儀色譜柱在色譜分析系統中主要起著分離物質的作用，是液相色譜的核心部件，同時也是損耗品。

樣品中所含有的鹽、脂質、疏水蛋白質和其它一些生物物質都有可能與色譜柱發生相互作用，一些保留值較小的物質如鹽類比較容易被沖出色譜柱，而一些保留性較強的組分，流動相溶液不足以把這些物質洗脫下來，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質通常就會積累在柱頭。當這些被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使之形成新的固定相而改變分離機理，以致樣品保留時間會出現不一致，或者是拖尾現象。

1-堵頭；2-柱頭螺絲；3-刃環；4-聚四氟乙烯O形圈；5-多孔不銹鋼燒結片；6-色譜柱管；7-色譜填料

為了延長色譜柱的使用壽命，上一篇文章已經提出，應在分析柱前連接一個保護柱。YMC專用保護柱是內徑為1.0mm、2.1mm、3.0mm、4.0mm，長10mm或20的短柱，并且填充和分析柱相同的填料，可看作是分析柱的縮短形式，安裝在分析柱前。（注：保護柱和分析柱的填料一定要保持一致，否則可能會出現峰形分叉等現象），其作用是收集、阻斷來自進樣器的機械和化學雜質，以保護和延長分析柱的使用壽命。一只1cm長的保護柱就能提供充分的保護作用。若選用較長的保護柱，可降低污染物進入分析柱的機會，但會引起譜帶擴張。因此選擇保護柱的原則是在滿足分離要求的前提下，盡可能選擇對分離樣品保留低的短保護柱。

1-保護柱套；2-保護柱芯；3-PEEK標準通用接頭；4-分析柱接頭；5-連接六通進樣閥接頭

對硅膠基體的鍵合固定相，流動相的pH值建議保持在2.5～7.0之間。具有極端值的流動相會溶解硅膠，而使鍵合相流失。對于有機雜化硅膠基質的色譜柱，流動相的pH值可以拓寬至1-12，但是對于多重的極端條件，不建議長期使用，如pH1-12，同時水相的比例在90%-100%之間。

對普通反相C18 鍵合相柱，如YMC-Pack C18和YMC-Pack Pro C18除去柱中含有的緩沖溶液鹽類或水溶性物質時，不應使用純水沖洗。因為C18鍵合相像一條長鏈將硅膠黏結，當有有機溶劑存在時，其表面被流動相潤濕，C18長鏈完全展開，像海水中的海藻一樣。當純水或緩沖溶液通過時，C18鍵合相與其不浸潤，鍵合相表面會塌陷，從而將溶劑、樣品分子或無機鹽分子包合。此時僅用純水無法將包合物洗脫出，應使用含5％有機溶劑的水溶液沖洗，才可清除無機鹽或水溶性物質。對于YMC-Pack C18-AQ和YMC-Triart C18，因為做了特殊的處理和修飾，即便再100%水相，填料表面也不會干涸，仍然保持浸潤狀態，因此如果需要用到高水相的條件，建議選擇合適的色譜柱。

硅膠、氧化鋁或正相鍵合相柱，應保存在流動相中。氰基柱不能保存在純有機溶劑(如甲醇或乙腈)中，應保留在欲使用的流動相中；氨基柱保存在乙腈中，而非流動相，并且應注意不可使用丙酮作流動相。C18反相柱應保存在純甲醇溶劑中，對填充高交聯度苯乙烯-二乙烯基苯共聚微球的非極性固定相也可用此法保存。

對使用時間較長、柱效逐漸下降的色譜柱，可用下述方法進行快速再生，以除去微量不潔雜質在柱頭的聚積。

再生指導：色譜柱反接，不接檢測器，用下面不同極性的試劑沖洗色譜柱，每種至少20倍的柱體積

反相（C30、C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP）

極性樣品：Water, Methanol, THF, Methanol, water, phase

非極性樣品：isopropanol, THF, Dichloromethane, Hexane, Isopropanol, phase

正相（Diol、amino、Silica、PVA-sil、cyano）

極性樣品：Water Methanol THF Methanol Water phase

非極性樣品：Chloroform, Methanol, Dichloromethane, Heptane or Isocyanate , Isopropanol, phase