一、定義
（cDNA Library）某種生物基因組轉錄的全部mRNA經反轉錄產生的cDNA片段分別與克隆載體重組，并將其引入到相應的宿主細胞中（一般為E.coli.）繁殖和擴增，理論上此群體就包含有該物種的全部mRNA信息，稱該生物基因組的cDNA文庫。
二、原理
經典cDNA文庫構建的基本原理：用Oligo（dT）作逆轉錄引物，或者用隨機引物，給所合成的cDNA 加上適當的連接接頭，連接到適當的載體中獲得cDNA文庫。其基本步驟包括：
（1）mRNA的提純獲取高質量的mRNA是構建高質量的cDNA文庫的關鍵步驟之一。
（2）cDNA第一條鏈的合成。
（3）cDNA第二條鏈的合成。
（4）雙鏈cDNA的修飾。
（5）雙鏈cDNA的分子克隆。
（6）cDNA文庫的擴增。
（7）cDNA文庫鑒定評價。