目前分離得到的tRNA前體有兩類：
①含單個tRNA的tRNA前體，在5′端和3′端各有一段多余順序；
②含二個tRNA的tRNA前體，除5′端和3′端有長短不一的多余順序外，在兩個tRNA之間還有數目不等的核苷酸隔開。有的真核tRNA前體的反密碼子環區含有一個居間順序。
原核和真核生物tRNA前體的后加工有相似的步驟：
①修飾：對tRNA分子上的部分核苷酸進行修飾（包括甲基化、酰化、硫代和重排等）；
②切除5′端和3′端多余核苷酸；
③3′端不含CCA順序的tRNA前體需裝上CCA順序。
原核與真核tRNA前體的加工過程還有不同的情況：
①原核多順反子tRNA前體，需加工時切開；
②含有居間順序的真核tRNA前體，加工時需除去居間順序。首先，tRNA前體被一內切核酸酶將居間順序切除，產生帶有 2′，3′-環磷酸的5′半分子和含有5′羥基的3′半分子；然后兩個半分子分別在2′，3′-環磷酸二酯酶和多核苷酸激酶作用下使5′半分子露出了羥基和2′磷酸基，使3′半分子帶上5′磷酸基，這兩個半分子再先后經過連接酶和磷酸單酯酶（去除2′磷酸基）的作用，最后生成成熟的tRNA。