其它源細胞原代細胞與傳代培養

其它源細胞原代培養：

1、取約500mg脂肪組織（自外科手術患者的皮下獲取），再將脂肪組織一次擠壓進入準備好的15m離心管中，每個離心管中的組織不超過5ml。

2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中，用吸管吹打10~20次，然后靜置1min左右，用吸管將組織下層的液體吸出。如此反復直到所吸出的液體呈透明狀，不帶有血細胞為止。

3、向有其它源細胞的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液（胰酶0.25%，I型膠原酶0.1%以1：1比例混合配制而成），將試管密封，放入37°C恒溫搖床中，190r/min，震蕩消化30min。此時液面分為3層，上層為黃色油狀脂肪細胞層，中層為脂肪組織層，下層為含單個核細胞的液體；

4、吸出離心管中的下層液體移入含完全培養基（含10%胎牛血清的高糖DMEM）的新離心管中終止消化，然后將離心管封閉，1500rpm離心10min。

5、用吸管吸取上清后去掉，加入1ml培養基，輕輕吹打10~20次制成細胞懸液，將各個離心管中的胞懸液收集起來，接種待用。

6、在剩余脂肪中加入新的胰酶和膠原酶，重復以上步驟繼續消化，重復2-3次，將收集到的有核細胞按照一定的密度接種到培養瓶中，放入37°C、5%?CO2培養箱培養；

7、次換液：大約12-24小時后，觀察細胞貼壁即可進行次換液，此后每隔3天換液，待細胞生長至融合后進行傳代。

其它源細胞傳代培養：

1、在超凈工作臺內吸去培養瓶內的舊培養基，加PBS沖洗2-3次，之后加入1-2mL消化液（0.25%胰酶和0.04%?EDTA(v/v?1:1)）。

2、培養箱內進行消化（3-5min），倒置顯微鏡下觀察其它源細胞形態變化，當貼壁的脂肪干細胞胞回縮，細胞間隙不斷增大，細胞呈近球形同時有少量圓形細胞脫壁時，加入等體積的培養基終止消化。

3、用吸管反復有序輕輕吹打瓶壁上的細胞（動作要輕柔，注意不要產生氣泡），使細胞脫離瓶壁后呈單細胞懸液。

4、將單細胞懸液移至離心管中，離心，(1000rpm,5min)，棄上清，加入完全培養基，輕吹使之松散，按1:2傳代培養。

其它源細胞干細胞：

干細胞是具有自我復制和多向分化潛能的原始細胞，是生命的其它源細胞，是形成人體各種組織器官的原始細胞。干細胞技術是生物治療的前沿技術，稱之為再生醫學。干細胞是具有自我復制和多向分化的原始細胞，是機體的起源細胞，是形成人體各種組織器官的原始細胞。

干細胞是一類具有自我更新能力的多潛能細胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞或組織器官，醫學界稱其為"萬用細胞"。干細胞是指尚未分化的細胞，存在于早期胚胎、胎盤及其附屬物、骨髓、外周血和成年組織中，它能夠被培養成肌肉、骨骼和神經等200多種人體細胞、組織和器官。干細胞技術的作用就是:能再造一種全新的、正常的甚至更年輕的細胞、組織和器官。