實驗概要
本實驗介紹了農桿菌介導的水稻轉化。
主要試劑
GUS染色液：100 mmol/L NaPO4 (pH7.0)；0.1% Triton X-100；10 mmol/L EDTA；0.5 mmol/L亞鐵氰化鉀
頭抱霉素，乙醇，次氯酸鈉溶液
主要設備
高速離心機，培養箱，人工氣候室
實驗材料
水稻種子
實驗步驟
1. 幼胚愈傷組織的誘導
取開花后12-15天的種子，70%乙醇消毒1分鐘，無菌水沖洗2-3遍；再用2%有效氯的次氯酸鈉溶液振蕩消毒60分鐘以上，無菌水沖洗4-5遍，然后在無菌條件下分離出幼胚，接在N6D2培養基上，于28℃暗培養4天。
2. 根癌農桿菌的培養
從YEB固體培養基上挑取根癌農桿菌單克隆接種到20ml含Km 50mg /l的YEB液體培養基中28℃搖菌培養至對數生長晚期；再從中取0.5mI轉接至50mI同樣的YEB培養基中，同樣條件下培養至OD600為0.5左右。
3. 共培養及轉化、篩選、分化
1) 將培養好的根癌農桿菌4000g離心10分鐘后，沉淀用等體積的AAM-AS培養基重懸；
2) 將預培養4d的來源于中花11號幼胚的愈傷組織侵入此AAM-AS菌液中侵染20min，用無菌濾紙吸干后轉移到N6D2C培養基上(在培養基表面鋪一張無菌濾紙)，25℃，暗培養3d；
3) 將愈傷組織用含300mg/L頭抱霉素的無菌水洗滌4-5遍，無菌濾紙吸干后轉至N6D2S1培養基上，篩選一代；
4) 兩周后，轉移至N6D2S2培養基上篩選二代((2周/代)；
5) 取出經過3代篩選生長旺盛的抗性愈傷組織，轉移至預分化培養基上，在分化培養箱(12小時光周期，白天28℃，夜晚25℃)中培養7d；然后轉移至分化培養基上，在分化培養箱中培養至產生再生苗；
6) 再生的植株在生根壯苗培養基上生根壯苗；
7) 待小苗長至10厘米左右時，打開容器封口膜，煉苗2-3天，然后將小苗移入人工氣候室栽培。
4. 水稻組織培養和轉化過程中使用的培養基及其成分
5. 轉化植株的組織化學分析
將經根癌農桿菌轉化后產生的抗性愈傷組織及轉化植株的葉片和根段分別放到GUS染色液中，抽氣幾分鐘，然后置于37℃溫育過夜，觀察藍色反應。染色后的組織用70%乙醇脫色。