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  • 發布時間:2022-04-12 18:05 原文鏈接: 農桿菌介導法概述

      農桿菌介導法起初只被用于雙子葉植物中,農桿菌的介導轉化在一些單子葉植物(尤其是水稻)中也得到了廣泛應用。此外,生物技術學家還可以通過發根農桿菌轉化,在液體培養基中培養高密度的根,作為一種在轉基因植物中獲得大量蛋白質的方法。

      農桿菌Ti質粒的T-DNA可高效率地整合到植物受體細胞的染色體上并得到表達。利用這一特點,Marton等(1979)以植物原生質體為受體首創了“共培養法”(co-cultivation)。后來經過一系列改進,特別是Horsch等(1985)建立的“葉盤共培養法”(leaf discco-cultivation),使這種轉化方法更加實用。

      所謂“共培養法”是指將根癌農桿菌與植物的原生質體、懸浮細胞、葉盤、莖段等放在一起共同培養而實現轉化的方法。首先用打孔器從消毒的葉片上取得葉網片,亦稱之葉盤,將其放在對數生長期的農桿菌的菌液中浸泡數秒鐘后,置于培養基上共同培養2~3d。待葉盤周圍的菌株生長至肉眼可見菌落時,轉移到含有抑菌劑的培養基中除去農桿菌,同時在該培養基中加入抗生素進行轉化體選擇,經過3~4周的組織培養即可獲得轉化的再生植株。世界上已有的轉基閃植物,大多數是通過農桿菌介導法得到的 。

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