1.組織用4%多聚甲醛固定6-8小時，轉至20%蔗糖溶液至組織沉底。
2.冰凍切片8-10μm，推薦瑞沃德冷凍切片機，溫度穩定，切片質量高。室溫放置30分鐘以上防脫片，-20℃保存。從冰箱拿出的冰凍切片在室溫放置30分鐘以上再進行免疫熒光。
3.1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。
4.用2%BSA室溫或37℃封閉1小時。
5.一抗4℃孵育過夜。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。
6.二抗室溫或37℃，避光孵育1小時。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。
7.DAPI染色。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。
8.滴加防淬滅劑，封片。