切片機的使用
抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離,使切片平滑通過。抗卷板略高于刀面的最高點。可憑經驗調整刀對組織的角度,一般新刀為20゜。操作程序:先接通電源,調定恒冷箱溫度,調整切片刀的角度,調定切片厚度,標本置載臺致冷達所需溫度后,將其安放在切片機推進器上。即可切片。 恒冷箱視使用情況每周或每月清潔一次冰霜。新刀切片滿意,舊刀用自動磨刀機磨刀較好。如果切片刀與抗卷板的位置,角度合乎要求,又有一把銳利的刀,就能獲得理想的切片。
新鮮的組織
組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好,才能避免冰晶,常用的驟冷劑有:① CO2氣(-78℃) ② 丙酮干冰冷卻的輕石油醚、乙烷和庚烷(-80℃) ③ 液氮(-190℃)④ 液氮冷卻的丙烷(-19℃)。液氮適用于組織化學,較安全。缺點:組織塊易發生龜裂。
固定組織
為防止水解酶和其他物質的移位、彌散,常用4℃、24小時的甲醛固定能很好地保存酶類。但對許多脫氫酶和轉移酶能滅活。故不宜使用,低溫,冷甲醛短時間固定(10分鐘左右)固定,可顯示琥珀酸脫氫酶。 電鏡出現后,需要保存細胞的超微結構,以4%緩沖戊二醛(25%戊二醛16ml;0.1M二甲胂酸(pH7.)84ml;蔗糖8g)固定較好。這些固定液主要用于水解酶,而不適于許多氧化還原酶和轉移酶。
恒冷箱溫度
一般在冷凍后10分鐘,到接近冷室溫度時再切,一般組織在-15~-20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度,Pearse及Bancroft的經驗如下:
組織 刀溫度 組織溫度 恒冷箱溫度
肝 -18 -10 -5 腎 -15 -8 -5 皮膚 -35 -10 -5 腦 -18 -5 -5 固定組織一般高3-5度