操作：
1、 培養細胞（96孔板，每組3正常、3損傷、3損傷恢復）
2、 PBS洗，5min X 3次 (小心)
3、 甲醇固定10min
4、 PBS洗，5min X 3次
5、 加入封閉液（1:10） 25μl，37 ℃，30min，吸去上清液，濾紙吸干
6、 加一抗（1:300）25μl，37 ℃，1h
7、 PBS洗，5min X 3次
8、 加二抗（1ml PBS加入生物素化山羊抗小鼠IgG 10μl）25μl，37 ℃，1h
9、 PBS洗，5min X 3次
10、 加0.3％ H2O2-PBS（甲醇），37 ℃，30min
11、 PBS洗，5min X 3次
12、 SABC工作液（1ml PBS加入SABC 10μl，混勻）20-30μl，37 ℃，1h
13、 PBS洗，5min X 3次
14、 DAB顯色：DAB顯色工作液配制（現配）：1ml蒸餾水，加試劑盒中A、B、C試劑各一滴，混勻后加至細胞孔板，鏡下控制，以蒸餾水終止反應。
15、 觀察結果
注意事項：
1、 一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗濃度和延長孵育時間；背景過高時，可降低一抗濃度和縮短孵育時間。
2、 如果染色背景過高，在SABC反應之后，DAB顯色之前，用加有0.01－0.02％的TWEEN20的PBS洗滌標本4次，單純PBS洗2次，然后DAB顯色。