2.3
凋亡細胞的TUNEL和ISNT鑒定的流式細胞儀分析[16]對于培養的細胞，可以將TUNEL或ISNT鑒定同流式細胞儀結合起來分析其發生凋亡的情況。待檢細胞與含有TdT或DNA聚合酶I或Klenow片段及生物素標記的dUTP反應液共孵育一段時間后，加入熒光素（常用FITC）標記的鏈霉抗生物素蛋白（streptavidin），使之特異性地與掛在DNA斷鏈上的生物素結合，然后在流式細胞儀上分析熒光強度，可結合其他的熒光染色方法（如PI染色和熒光免疫表型鑒定）行多參數的流式細胞儀分析，使之有很廣的應用價值。該方法的主要優點有：可根據熒光強度對凋亡細胞作出定量分析；可以區別凋亡和壞死；結合表型鑒定，確定不同來源的細胞群中某一或幾種細胞亞群的凋亡；其檢測與凋亡相關的DNA降解片段的特異性和敏感性比瓊脂糖凝膠電泳高得多，能檢測出少于（2～5）×103個細胞的DNA斷鏈。
3 細胞凋亡的ELISA檢測[17]
細胞凋亡ELISA檢測就是基于酶聯免疫吸附夾心法測定原理，用單克隆抗DNA抗體和抗組蛋白抗體直接檢測DNA和組蛋白，可特異性定量檢測細胞溶解物細胞漿成分中的單和寡核苷酸小體。其優點有：無需使用放射性同位素；可對細胞凋亡進行定量檢測；抗組蛋白抗體無物種的特異性，可用于各種物種的細胞凋亡的檢測；高敏感性，較少的細胞就可獲得結果。
4 結語
瓊脂糖凝膠電泳簡單、方便，出現“梯狀”帶雖能證實凋亡，但只能定性不能定量，不是隨時電泳都能得到“梯狀”帶，因而敏感性不高，且這種方法一般只用于培養的細胞，而組織的異源性不能保證該方法的特異性；其他一些電泳方法如反轉電場凝膠電泳和彗星鑒定也有其自身的應用條件，針對性較強。原位末端標記法的出現，是細胞凋亡方法學上的一大進步，特別是經眾多學者的應用和完善，其特異性尤其是敏感性方面有了很大的提高，廣泛應用于各種組織、細胞培養的細胞凋亡的研究，特別是結合抗原免疫表型鑒定和流式細胞儀分析，可以區分不同來源的組織或細胞中的某種或幾種細胞亞群的凋亡，并進行定量研究。正如上面所說，該方法的特異性有一定的限度，就其技術本身而言，并不能區別凋亡、壞死和自溶性死亡，必須結合凋亡細胞的形態學特征加以判斷。因此，在細胞凋亡的研究中，多種方法的結合是必要的，也是必須的。
作者簡介：譚曉華,男,1962年出生,博士,主治醫師作者單位：姜泊 張亞歷 周殿元 (第一軍醫大學南方醫院消化內科研究所，廣州，510515)
譚曉華 (北京軍區總醫院肝病研究所)
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