1、作用：促使原奶凝結，為排出乳清提供條件。
2、種類
凝乳酶有三種狀態：液態、粉狀和片劑。傳統上利用牛犢第四胃的皺胃酶提取制作凝乳酶，近來凝乳酶的來源不斷擴大，目前包括三類：動物性凝乳酶，來源于牛胃、豬胃和羊胃；植物性凝乳酶，來源于無花果樹液和菠蘿果實；微生物凝乳酶，來源于霉菌和酵母菌。丹麥干酪生產中來源霉菌的凝乳酶得到廣泛應用。
3、凝乳酶的活力
指1毫升凝乳酶溶液或1克干粉在35攝氏度條件下，40分鐘內能凝結原奶的毫升數。標準液態凝乳酶的活力通常是1.2-1.5萬，粉狀凝乳酶是前者10倍，為12-15萬。
4、原奶凝結過程
原奶中酪蛋白有三種：αs-酪蛋白、β-酪蛋白和К-酪蛋白，前兩者易受Ca+2影響形成沉淀，而后者不僅穩定，而且還具有抑制前者沉淀的作用。凝乳酶使原奶凝固分為兩個階段：首先將К-酪蛋白分解為副К-酪蛋白；其次副К-酪蛋白及αs-酪蛋白和β-酪蛋白在Ca+2作用下沉淀。
5、影響凝乳酶活性的因素
（1）PH：在酸性環境中凝乳酶活力最強，原奶酸度的任何微小變化均能顯著影響凝乳酶的活力。凝乳酶活力大部分來源于其中的胰蛋白酶，小部分來源于牛胃蛋白酶（不過豬凝乳酶中的有效成分是豬胃蛋白酶）。胰蛋白酶的最適PH為5.4，而胃蛋白酶的最適PH低于胰蛋白酶。
（2）溫度：凝乳酶的最適溫度是42攝氏度。（到55-60攝氏度，酶本身受到破壞）因為乳溫明顯影響凝結速度。乳溫30攝氏度時原奶凝結時間是42攝氏度的2-3倍。不過實際干酪生產中乳溫通常保持在30-33攝氏度，一是考慮到乳酸菌的最適溫度（比如鏈球菌屬的最適溫度在30攝氏度左右，最高不能超過40攝氏度）；二是較高乳溫下凝塊硬化速度太快，以至隨后的切割比較困難。
（3）Ca+2濃度：只有原奶中存在自由鈣離子時，被凝乳酶轉化的酪蛋白才能凝結。因此鈣離子濃度將會影響凝乳時間、凝塊硬度和乳清排出。
6、凝乳酶的添加量
通常用量是100kg原奶添加20-40毫升凝乳酶溶液。凝乳時間與凝乳酶用量成反比，用量翻倍，則凝乳時間減半。
乳清的排出不受凝乳酶用量的影響，實驗表明凝乳酶的用量與24小時后干酪的含水量及PH質無關。不過用量影響干酪的成熟，用量大，則成熟期間蛋白質的分解會加快；同時由于凝乳酶分解蛋白質產生苦味肽，因此用量大也會增加干酪的苦味。