臨床輸血安全保障日益受到重視,隨著試劑及技術的改進,過去因血型鑒定靈敏度方面的誤差所引起的嚴重輸血反應已鮮有報道。人類紅細胞有29個血型系統,不規則抗體在正常人群中檢出率為0.3%-2%。抗體篩查是輸血前常規檢查,其目的是保障輸血安全。采用一種靈敏度高,特異性好,結果準確的檢測方法對患者輸血前或者供血者常規抗體篩選,借以發現有臨床意義的不規則抗體,對臨床安全輸血具有重要的意義。
抗體篩檢可以發現有意義的不規則抗體,保證患者用血安全,避免因血型不合引起的輸血反應。早期的鹽水法因只能篩查出IgM抗體早已淘汰,目前應用于臨床的方法主要是凝聚胺法、微柱凝聚法、抗人球蛋白法等。紅細胞不規則抗體篩選的經典方法為抗人球蛋白法,但由于此方法操作復雜,技術要求高,因此在臨床的開展曾一度受到限制;凝聚胺法由于操作簡單方便,目前成為國內開展紅細胞不規則抗體篩選的常用方法。近年來發展起來的微柱凝膠技術(MGT)是在經典的抗人球蛋白試驗基礎上發展起來的新型檢測方法,已被廣泛應用于血型鑒定、交叉配血及不規則抗體篩查。
一、凝聚胺法
凝聚胺(polymatching)法首先利用低離子介質降低溶液的離子強度,減少紅細胞周圍的陽離子云,促進血清(漿)中的抗體與紅細胞相應抗原結合,再加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液,中和紅細胞表面的負電荷,縮短細胞間距,形成可逆的非特異性聚集,并使IgG型抗體直接凝集紅細胞。加入中和液后,僅由凝聚胺引起的非特異性聚集,會因電荷中和而分散,而由抗體介導的特異性凝集則不會分散。凝聚胺是一種抗肝素藥物,所以對于含肝素的血液標本要稍稍多加一些凝聚胺來中和肝素。有研究報道,凝聚胺法對Kell系統的抗體檢出不理想,所以陰性結果要轉入抗人球蛋白試驗,以免漏檢。K的抗原頻率約為7%,由于K抗原具有較強的免疫原性,所以歐美國家都將Kell作為輸血前血型檢測的必檢項目。中國人群中,Kell血型一直被認為多態性較單一,基本都為K,且K的頻率約為0.07%,因此輸血前不進行K抗原的定型。
二、微柱凝膠技術
微柱凝膠技術作為一項免疫學檢測技術,是凝膠過濾技術和抗原抗體反應的結合,已在歐美等發達國家作為常規性檢測技術應用于臨床,由于凝膠顆粒具有分子篩作用,抗原抗體反應后的紅細胞通過離心經過微柱,無IgG結合的紅細胞穿過凝膠到達底部,而紅細胞上若有IgG抗體結合則會被凝膠中的抗IgG拉住,紅細胞被阻止在凝膠柱上層或中間。
微柱凝膠系統采用凝膠過濾技術和離心技術及抗原抗體反應,凝集的紅細胞不能通過凝膠間隙而留在凝膠的上層呈陽性反應,而未凝集的紅細胞離心時可通過凝膠間隙而沉積在凝膠管的底部呈陰性反應。
三、凝聚胺法與微柱凝聚法對比
由于有些抗體存在劑量效應關系,篩選細胞可用純合子細胞。傳統的方法通常采用間接抗人球蛋白實驗,費時費力,工作量大。由輸血產生的免疫性抗體,以Rh抗體為最多,各抗體頻率的多少主要取決于抗原的免疫原性及其在人群中的分布頻率。一般說,抗原的免疫原性越大,產生抗體的機會越多。
微柱凝膠法與凝聚胺法相比:
1、微柱凝膠法比凝聚胺法檢測受血者免疫性不規則抗體靈敏度高,結果更準確。對抗體含量低的弱抗體,往往凝聚胺試驗陰性時,微柱凝膠法仍可檢出。其靈敏度較凝聚胺法高1-5個滴度,比傳統試管法要高出2-7個滴度。
2、標準抗血清與對應篩選紅細胞在微柱凝膠卡中的凝集強度較凝聚胺法強。
3、凝聚胺法結果穩定可靠容易判斷,標本用量少、易標準化,適用于臨床常規不規則抗體篩檢。
4、微凝膠免疫檢測法結果穩定,重復性好,技術容易掌握,尤其是不同人員的操作結果一致,避免人為因素的影響。
5、微凝膠免疫檢測法孵育、離心時間較長,而且價格較貴(是凝聚胺試驗的5倍),也是推廣應用較慢的原因。
對ABO血型的誤判,也不能通過抗體篩查糾正查出。因此即使不規則抗體篩查陰性,還必須用能快速檢測出不完全抗體的方法交叉配血,以確保輸血萬無一失。微柱凝膠技術可以有效預防ABO以外抗體引起溶血性輸血反應的發生。
可見,微柱凝膠法靈敏度更高,效價較低的抗體也可檢測到。凝聚胺因效價因素漏檢國內也曾有文獻報道,另外,凝聚胺法也受人為操作因素影響,如加試劑量、離心機控制、振蕩觀察等等都會帶來人為的誤差而漏檢。相對而言,微柱凝膠法的反應卡操作易掌握、結果穩定、受人為因素的影響小,已成為輸血檢查的推薦方法。綜上所述,不規則抗體的篩選對于臨床輸血安全非常重要,通過比較凝聚胺和微柱凝聚法兩種方法都基本能一致地對輸血前有效把關,對于軟硬件條件較好的大醫院,選用微柱凝聚法是最好的選擇,而對于基層醫院或者急診需要,凝聚胺法以其簡便快速準確、成本低等方面的優點也可推廣使用。