測定方法
根據中華人民共和國藥典三部 附錄X N 人凝血因子VIII測定法(一期法)
本法系用人凝血因子VIII缺乏血漿為基質血漿,采用一期法測定供試品人凝血因子VIII效價。
試劑
(1)3.8%枸櫞酸鈉9.5g,加水溶解并稀釋至250ml。
(2)咪唑緩沖液(pH7.3)取咪唑0.68g和氯化鈉1.17g,加水使溶解成100ml,加入0.1mol/L鹽酸溶液42.2ml,再加水稀釋至200ml,即得。
(3)稀釋液取一體積的3.8%的枸櫞酸鈉加入5體積咪唑緩沖液混合,加適量20%人血白蛋白至終濃度為1%
(4)激活的部分凝血活酶(APTT)試劑
(5)人凝血因子VIII缺乏血漿 為人凝血因子VIII含量低于1%的人血漿或人工基質血漿
(6)0.05mol/L氯化鈣溶液取氯化鈣(CaCl2·2H2O)147g,加水溶解并稀釋至1000ml,配制成1mol/L的氯化鈣貯存液,用前用水稀釋20倍,配制成0.05mol/L氯化鈣溶液。
人凝血因子VIII標準液的制備 用人凝血因子VIII缺乏血漿將標準品稀釋成每1ml含1IU凝血因子VIII,再用稀釋液分別進行10倍、20倍、40倍和80倍稀釋,置冰浴待用。
供試品溶液的制備 用人凝血因子Ⅷ 缺乏血漿將標準品稀釋成每1ml含1IU凝血因子Ⅷ,再用稀釋液進行10倍和20倍或40倍稀釋,置冰浴待用。
測定法
取激活的部分凝血活酶試劑0.1ml,置37℃水浴保溫一定時間(一般4min),加入凝血因子Ⅷ缺乏血漿0.1ml、供試品溶液0.1ml,混勻,置37℃水浴保溫一定時間(一般5min),加已預熱至37℃ 0.05mol/L氯化鈣溶液0.1ml,記錄凝固時間。
用不同稀釋度的人凝血因子Ⅷ標準溶液0.1ml替代供試品溶液,同法操作。
將標準溶液人凝血因子Ⅷ效價(IU/ml)的對數對其相應的凝固時間(秒)的對數進行直線回歸處理,求出直線回歸方程。計算供試品溶液人凝血因子Ⅷ效價,再乘以稀釋倍數,即為供試品人凝血因子Ⅷ效價(IU/ml)。
注意事項
1. 大量反復輸入本品時,應注意出現過敏反應,溶血反應及肺水腫的可能性,對有心臟病的患者尤應注意。
2. 本品溶解后,一般為澄清略帶乳光的溶液,允許微量細小蛋白顆粒存在,為此用于輸注的輸血器必須帶有濾網裝置,但如發現有大塊不溶物時,則不可使用。
3. 本品對于因缺乏因子Ⅸ所致的乙型血友病,或因缺乏因子Ⅺ所致的丙型血友病均無療效,故在用前應確診患者系屬因子Ⅷ缺乏,方可使用本品。
4. 本品不得用于靜脈外的注射途徑。
5.本品一旦被溶解后應立即使用。未用完部分必須棄去。
孕婦用藥
目前尚無凝血因子Ⅷ對動物生殖影響的研究,也不清楚因子Ⅷ用于孕婦是否會對胎兒造成損害或影響生育能力。人凝血因子Ⅷ制劑僅在十分必須的情況下才給孕婦使用。
兒童用藥
應慎重。[1]