分光光度法檢測食品中二氧化硫

食品中二氧化硫的測定方法

測定二氧化硫的主要方法有：鹽酸副玫瑰苯胺比色法、蒸餾滴定法、碘量法等。

2.1  鹽酸副玫瑰苯胺光度法測定二氧化硫

2.1.1 原理：

二氧化硫(或來自亞硫酸鹽)被四氯汞鈉吸收后，生成穩定的絡合物，再與甲醛和鹽酸副玫瑰苯胺作用，并經分子重排后，生成紫紅色的絡合物。顏色的深淺與二氧化硫的濃度成正比，可以比色測定。

本方法使用于各類食品中游離型和結合型硫酸鹽殘留量的測定。方法操作

簡單、快速、靈敏度高，再現性良好。

2.1.2 試劑：

(1)5mol/L氫氧化鈉溶液；0.5mol/L硫酸溶液；12g/L氨基磺酸銨溶液。

(2)四氯汞鈉吸收液：稱取13.6g氯化高汞及6g氯化鈉，溶于水中并稀釋至1000m1，放置過夜，過濾后備用。

(3)甲醛溶液：吸取0.55m1無聚合沉淀的36％甲醛，加水99.45ml稀釋，混勻。

(4)淀粉指示液：稱取1g可溶性淀粉，用少量水調成糊狀，緩緩傾入100m1沸水中，隨加隨攪拌，煮沸，放冷備用，此溶液臨用時現配。

(5)亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀[K Fe(CN) ，·3H 0]，加水溶解并稀釋至100m1。

(6)乙酸鋅溶液：稱取22g[Zn(CH COO) ·2H20]，溶于少量水中，加入3m1冰乙酸，加水稀釋至100m1。

(7)鹽酸副玫瑰苯胺溶液：稱取0.1gC H N Cl·4H20于研缽中，加少量水研磨使溶解并稀釋至100ml。取出20ml，置于100ml容量瓶中，加鹽酸溶液6mol／L，充分搖勻后使溶液由紅變黃，如不變黃再滴加少量鹽酸至出現黃色，再加水稀釋至刻度，混勻備用(如無鹽酸副玫瑰苯胺可用鹽酸晶紅代替)。

    鹽酸副玫瑰苯胺的精制方法：稱取20g鹽酸副玫瑰苯胺于400m1水中，用50ml鹽酸溶液2mol／L酸化，徐徐攪拌，加4—5g活性炭，加熱煮沸2min。將混合物倒入大漏斗抽濾，過濾(用保溫漏斗趁熱過濾)。濾液放置過夜，出現結晶，然后再用布氏漏斗抽濾，將結晶再懸浮于1000ml乙醚—乙醇(10:1)的混合物中，振搖3—5min，以布氏漏斗抽濾，再用乙醚反復洗滌至醚層不帶色為止。于硫酸干燥器中干燥，研細后儲存于棕色瓶中保存。

    (8)0.1mol／L碘溶液。

(9)0.1mol／L硫代硫酸鈉標準滴定溶。

(10)二氧化硫標準儲備溶液：稱取0.5g亞硫酸鈉，溶于200m1四氯汞鈉吸收液中，放置過夜，上清液用定量濾紙過濾備用。

    吸取10m1亞硫酸氫鈉—四氯汞鈉溶液于250ml碘量瓶中，加100m1水，準確加水20m1碘溶液和5m1冰乙酸，搖勻，放置暗處2min后，迅速以硫代硫酸鈉標準滴定溶液0.1mol／L滴定至淡黃色。加0.5ml淀粉指示劑，繼續滴至無色。另取100m1水，準確加入20ml碘溶液，加5ml冰乙酸，按同一方法做空白試驗。

    計算：C=[(V —V )×C ×32.03]/10

    式中：C為二氧化硫標準溶液濃度(mg／m1)；C 為硫代硫酸鈉標準滴定溶液的濃度(mol／L)；V 為測定用二氧化硫標準溶液消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積(m1)；V 為試劑空白消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積(ml)；32.03為與1ml硫代硫酸鈉標準滴定溶液[c(Na S O )=1 mol /L]相當的二氧化硫的質量(mg)。

    (11)二氧化硫標準使用溶液：臨用前將二氧化硫儲備溶液以四氯汞鈉吸收液稀釋成每毫升含2ug二氧化硫。

2.1.3 儀器：UV-1300型紫外可見分光光度計。

2.1.4 操作方法：

    (1)樣品處理：水溶性固體樣品如白糖等，可稱取10g均勻樣品(樣

品量可視含量高低而定)，以少量水溶解，置于100m1容量瓶中，加入4m1 0.5mol／L氫氧化鈉溶液，5min后加入4 m1 0.5mol／L硫酸溶液，然后加入20m1四氯汞鈉吸收液，以水稀釋至刻度。

其他固體如餅干、粉絲等，稱取5—10g研磨均勻的樣品，以少量水濕潤并移人100m1容量瓶中，然后加入20ml四氯汞鈉吸收液，浸泡4h以上，若上層溶液不澄清，可加入亞鐵氰化鉀及乙酸鋅溶液各2.5m1，最后用水稀釋至刻度，過濾后備用。

    液體樣品如葡萄酒等：直接吸取血樣品5—10ml，置于100 ml容量瓶中，以少量水稀釋，加20ml四氯汞鈉吸收液，最后加水到刻度，搖勻，必要時過濾備用。

    (2)測定：吸取0.5—5m1上述樣品處理液于25ml具塞比色管中。

    另取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.5、2m1二氧化硫標準使用液(相當于0、0.4、0.6、0.8、1.2、1.6、2、3、4ug二氧化硫)，分別置于25m1具塞比色管中。

    于樣品及標準管中各加四氯汞鈉吸收液至10ml，然后加入1ml 12g／L氨基磺酸銨溶液、1m1甲醛溶液及1m1鹽酸副玫瑰苯胺溶液，搖勻，放置20min。用1cm比色杯以零管調節零點，于波長550nrn處測吸光度，并繪制標準曲線。

2.1.5 計算：

X=(m×1000)/[W ×V/100×1000×1000]

    式中：X為測試樣中二氧化硫的含量（g／kg）；m為測定用樣液中二氧化硫的質量；W為試樣質量（g）；V為測定用樣液的體積（ml）

2.2 碘量法測定二氧化硫測定

2.2.1原理：

樣品中的二氧化硫(包括游離型和結合型的)，加入氫氧化鉀破壞其結合狀態，并使之穩定。加入硫酸又使二氧化硫游離，然后用碘標準滴定溶液滴定。到達終點時，過量的碘即與淀粉指示劑作用，生成藍色碘—淀粉復合物。根據碘標準滴定溶液的消耗量計算出二氧化硫的含量。反應式如下：

    SO +2KOH→K SO +H O

    K SO 十H SO →K SO + H O +SO

    SO 十2 H O +I →H SO 十2HI

    本方法適用于食品中游離型和結合型二氧化硫含量的測定。

2.2.2 試劑：

    (1)1mol／L氫氧化鉀溶液：稱取57g氫氧化鉀溶于蒸餾水中，加水至1000ml。

    (2)25％硫酸溶液。

    (3)0.1mol／L碘標準滴定溶液。

    (4)10g／L淀粉溶液。

2.2.3儀器：250血碘量瓶。

2.2.4操作方法：

稱取樣品20g(固體樣品研細)，置于小燒杯中，用蒸餾水洗人250m1容量瓶中，加蒸餾水至總容量的二分之一，加塞振蕩，再加水至刻度，搖勻。待瓶內液體澄清后，用移液管吸取澄清液50ml注入250ml碘量瓶中，加入25m1 1mol／L氫氧化鉀溶液。將瓶內混合液用力振蕩后放置10min，然后一邊振搖一邊加入10ml 25％硫酸溶液和淀粉溶液1ml，以碘標準滴定溶液滴至呈現藍色并30s不褪色為止。同時以蒸餾水代替樣品按上法做空白試驗。

2.2.5計算：

X=[(V —V )C×0.032×1000]/(W×V /V )

式中：X為樣品中二氧化硫的含量(g／k8)；C為碘標準滴定溶液的濃度(mol／L)；V 為滴定樣品溶液消耗碘標準滴定溶液的體積(ml)；V 為滴定空白溶液消耗碘標準滴定溶液的體積(m1)；W為樣品質量（g）； V 為樣品處理液總體積（ml）；V 為測定用樣品處理液體積（ml）；0.032為與1ml 1mol/L碘標準滴定溶液相當的二氧化硫的質量（g）。

2.3  蒸餾滴定法測定二氧化硫

2.3.1原理：

在密閉容器中對樣品進行酸化并加熱蒸餾，以釋放出其中的二氧化硫，釋放物用乙酸鉛溶液吸收。吸收后用濃鹽酸酸化，再以碘標準溶液滴定，根據所消耗的碘標準溶液量計算出樣品中二氧化硫含量。

2.3.2測定方法：

固體樣品用刀切或剪刀剪成碎末后混勻，稱取約5．00g均勻樣品(樣品量可視含量高低而定)。液體樣品可直接吸取5—10mL樣品，置于500mL圓底蒸餾燒瓶中。將稱好的樣品置人圓底蒸餾燒瓶中，加入250mL水，裝上冷凝裝置，冷凝管下端應插入碘量瓶中的25mL乙酸鉛(20g／L)吸收液中，然后在蒸餾瓶中加入10mL鹽酸(1+1)，立即蓋塞，加熱蒸餾。當蒸餾液約200mL時，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾lmin。用少量蒸餾水沖洗插入乙酸鉛溶液的裝置部分。向取下的碘量瓶中依次加入10mL濃鹽酸、lmL淀粉指示液(10g／L)。搖勻之后用碘標準滴定溶液(0.01mol／L)滴定至變藍，且在30s內不退色為止。在檢測樣品的同時要做空白試驗。

2.3.3 計算：

計算公式如下：

X=[( V —V )×0.01×0.032×100]/m

式中：X為樣品中二氧化硫總含量(g/kg)；V 為滴定樣品所用碘標準滴定溶液的體積（mL）；V 為滴定試劑空白所用碘標準滴定溶液的體積（mL）； m為樣品質量（g）；0.032為1/2 SO 的毫摩爾質量g／mmol；0.01為滴定時所用I 標準溶液的濃度(mol／L)。