微量乙醇是低度果酒,含酒精飲料和調味品等發酵食品中重要的風味物質。目前,對于微量乙醇的測定主要以氣相色譜法為主,重鉻酸鹽氧化分光光度法測定微量乙醇含量,是一種快速準確的測定方法,它具有操作簡便,所需分析儀器簡單的特點,尤其適用于生產和質檢部門的日常分析。
一、測定原理
在酸性溶液中,乙醇可被重鉻酸氧化生成乙酸,重鉻酸鉀中的六價鉻被還原成三價鉻,其反應式為: 3C2H5OH+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2K2SO4+2Cr2(SO4)+11H2O
反應中生成的三價鉻為綠色,它在585nm處有最大吸收峰,且溶液顏色的深淺與乙醇含量成正比,可以在分光光度計上比色,通過與標準系列進行比較進行定量。
二、儀器與試劑
1、 UV-1300紫外可見分光光度計(美析儀器)
2、 蒸餾裝置
3、PHS—3C酸度計
4、乙醇標準溶液:準確吸取2.00mlGR級無水乙醇,置于預先裝有少量蒸餾水的100ml容量瓶中,混勻,加水定容至刻度,搖勻備用。
5、重鉻酸鉀溶液,稱取10.00gAR級K2Cr2O7,用少量水溶解,并定容至250ml。
6、濃硫酸:AR級,含量95~98%。
7、1%溴百里酚藍指示劑
8、 NaoH溶液:C(NaoH)=1.0mol/L
三、測定方法
1、標準曲線的繪制
取7支25mlA級比色管,各加入2.00ml重鉻酸鉀溶液和2.50ml濃H2SO4,混勻,并冷卻,依次加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.25ml乙醇標準溶液,混勻,反應10分鐘后加水至刻度,再次混勻,以0號管調零,于585nm波長處分別測定其吸光度,繪制標準曲線。
2、樣品的制備準確移取100.00ml樣品于250ml蒸餾燒瓶中,加入25mH2O,再加數滴溴百里酚藍指示劑,用NaoH溶液滴定至藍色(深色樣品用酸度計指示中和至中性),加幾粒沸石,連接好蒸餾裝置進行蒸餾,餾出液用100ml容量瓶收集,接收瓶用冰浴進行冷卻,緩慢蒸餾至接近刻度時取下,放入20℃水浴中30分鐘,用H2O定容至刻度,搖勻,備用。
3、樣品的測定
取1.00ml制備好的樣品,按標準曲線繪制的方法進行測定,利用回歸方程計算出樣品中乙醇的含量。