Desired pH Volume of 1M K2HPO4 (mL)Volume of 1M KH2PO4 (mL)
5.8 8.591.5
6.0 13.286.8
6.2 19.280.8
6.4 27.872.2
6.6 38.161.9
6.8 49.750.3
7.0 61.538.5
7.2 71.728.3
7.4 80.219.8
7.6 86.613.4
7.8 90.89.2
8.0 94.0 6.0
Dilute the combined 1M stock solution to 1 litre with distilled H2O
在大腸桿菌中，當外源蛋白高水平表達的時候，極易形成包涵體，為蛋白純化等下游工作帶來很大的麻煩。下面是一些可以參考的有助于提高目的蛋白可溶性表達的實驗方案：
1.降低蛋白合成的速度。可以通過以下方法實現：
a.降低培養溫度
b.使用弱啟動子
c.使用低拷貝數的質粒表達載體
d.降低誘導物的濃度
2.改變培養基。
a.培養基中加入可以幫助蛋白折疊的因子
b.加入緩沖液保持pH穩定
c.加入1%的葡萄糖，抑制lac啟動子
d.加入山梨糖醇等可以穩定蛋白天然結構的因子
e.加入乙醇， thiols and disulfides等？
3.與分子伴侶或折疊酶共表達。
常用的分子伴侶有：
GroES-GroEL
DnaK-DnaJ-GrpE
ClpB
常用的折疊酶有：
peptidyl prolyl cis/trans isomerases (PPI's)
disulfide oxidoreductase (DsbA) and disulfide isomerase (DsbC)
protein disulfide isomerase (PDI)
4.分泌表達。使目的蛋白分泌到周質空間。
周質空間的氧化性的環境有利于二硫鍵的形成，而胞內則是還原性的。
周質空間有折疊酶DsbA和DsbC的存在，幫助蛋白正確折疊。
周質空間很少有蛋白酶存在，不會被水解。
可以使對細胞有毒性的蛋白大量存在。
5.使用特定的菌株。
AD494, which has a mutation in thioredoxin reductase (trxB).
Origami，a double mutant in thioredoxin reductase (trxB) and glutathione
reductase (gor).
6.與可溶性partner融合表達。
7.表達目的蛋白的一個片段。> 70 kDa的蛋白在大腸桿菌中是很難表達的。
8.體外去折疊，重新折疊。