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  • 發布時間:2020-07-27 13:02 原文鏈接: 分子克隆蛋白表達實驗指南(十五)

      LB固體培養基
              Tryptone              1g
              Yeast Extract           0.5g
              NaCl                 1g
      Agar                 1.5g
      加蒸餾水至總體積為100ml,高壓蒸汽滅菌。滅菌后培養基不燙手時加入抗生素
      
      2×YT培養基
              Tryptone              1.6g
      Yeast Extract           1g
      NaCl                 0.5g
      加蒸餾水至總體積為100ml,高壓蒸汽滅菌
      
      10×SDS-PAGE電泳緩沖液
            Tris堿                      60.4g
            Glycine                     376g
            SDS                        20g
            先加1.3L水,溶解后蒸餾水定容至2L
      
      蛋白脫色液
          冰醋酸100ml, 甲醇100ml, H2O至1L
      
      1×PBS緩沖液
              NaCl                         4g
              KCl                          0.1g
              Na2HPO4 · 12H2O                  1.79g
              KH2PO4                                  0.12g
             先溶于400ml蒸餾水中,調PH值7.3,加水定容至500ml,高壓滅菌
             10×PBS配置直接將相應的成分×10,配制方法相同
      
      Tris-Cl(1M)
              用800ml蒸餾水溶解121.1g Tris base,加濃鹽酸調PH至所需值
              應使溶液冷至室溫后,方可最后調定pH值。加水定容至1L。分裝后高壓蒸
      汽滅菌。Tris溶液的pH值因溫度而定,溫度每升高1C,pH值大約降低0.03單位
      
      6×SDS sample buffer
              甘油(100%)               30ml
              TrisCl(pH 6.8,1.0M)         15ml
              EDTA(powder)             0.22g
              SDS(powder)               6g
              溴酚藍                            0.03g
              DTT                         0.6 mol/L
            Store in aliquots at -20C
      也可保存于室溫,但是使用前加入1/20體積的巰基乙醇,使ME終濃度為715 mM
            配制時用沸水浴或電磁攪拌器加熱,燒杯頂部用錫紙封閉,防止水分蒸發
            過濾除菌
      
      30%丙烯酰胺
              丙烯酰胺                    60g
              亞甲雙丙稀酰胺              1.6g
              加蒸餾水至200ml
      
      TrisCl pH 8.8(1.5mol/L)
        在50ml蒸餾水中溶解18.2g Tris base,用1mol/L HCl調pH至8.8,補加蒸餾水至100ml。4度保存
      
      TrisCl pH 6.8 (1.0mol/L)
        在50ml蒸餾水中溶解12.1g Tris based,用HCl調pH至6.8,定容至100ml
      
      10%過硫酸胺(AP)
        1g AP溶于10ml蒸餾水中。4C不能長期存放,一般2-3周
      
      10%SDS
      稱取20gSDS慢慢轉移到約含150ml的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至200ml
      
          IPTG(1 M)
            用8ml蒸餾水融解2.38g IPTG配制成1 M的溶液,用蒸餾水定溶至10ml。用0.22um過濾器過濾除菌,store -20C

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