分子雜交的原理分析

BILON品牌的FYY系列分子雜交儀號：200520070121X。該儀器采用微電腦智能控制，液晶顯示三種功能：溫度顯示、瓶架旋轉速度、托盤擺動速度。具有存儲記憶功能，可以直觀顯示系統的運行狀況。溫度控制采用數字PID技術，輸出采用PWM方式，控溫精度高，穩定性好，并設有超溫保護裝置。該儀器可以同時直觀箱內控溫溫度，滾動式瓶架旋轉速度，酶標板或試劑 托盤的擺動速度。同時任意選擇您所需要的控溫溫度，瓶架旋轉速度，搖床擺動速度。

分子雜交基本原理：

分子雜交指具有一定同源序列的兩條核酸單鏈（DNA或RNA），在一定條件下按堿基互補配對原則經過退火處理，形成異質雙鏈的過程。通過此原理，就可以使用已知序列的單鏈核酸片段作為探針，去查找各種不同來源的基因組DNA分子中的同源基因或同源序列。 

復性：變性DNA只要消除變性條件，二條互補鏈還可以重新結合，恢復原來的雙螺旋結構，整個過程稱為復性。 

退火：通常DNA熱變性后，將溫度緩慢冷卻，并維持在比Tm低25～30℃左右時，變性后的單鏈DNA即可恢復雙螺旋結構，這一過程又叫做退火。 

復性后的DNA，理化性質都能得到恢復。倘若DNA熱變后快速冷卻，則不能復性。 

影響復性速度的因素： 

1、DNA的濃度愈高，復性速度也愈快。 

2、DNA片段的大小：DNA片段愈大，擴散速度愈低，使DNA片段線狀單鏈互相發現互補的機會減少。因此，在復性實驗中，必要時將DNA切成小片段，再進行復性。 

3、溫度過高不利于復性。 

4、溶液的離子強度：通常鹽濃度較高時，復性速度較快。 

5、DNA順序的復雜性；簡單的分子復性很快，如polyd[T]和polyd[A]由于彼此互補識別很快，故能迅速復性。但順序較復雜的DNA分子復性則較慢。因此通過變性速率的研究，可以了解DNA順序的復雜性。

DNA變性：DNA變性是指雙螺旋之間氫鍵斷裂，雙螺旋解開，形成單鏈無規則線團，因而發生性質改變（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等） 。 

1.DNA變性的方法：加熱；改變DNA溶液的pH；有機溶劑（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素。 

2、增色效應：DNA在260nm處有zui大吸收值，由于含有堿基的緣故。在DNA雙螺旋結構模型中堿基藏于內側，變性時由于雙螺旋解開，于是堿基外露，260nm紫外吸收值因而增加，該現象稱為增色效應。利用DNA變性后波長260nm處紫外吸收的變化可追蹤變性過程。 

3、溶解曲線：升高溫度使DNA變性，以溫度對紫外吸收作圖，可得到一條曲線，稱為溶解曲線。 

4、融解溫度：通常人們把50%DNA分子發生變性的溫度稱為變性溫度（熔解曲線中點對應的溫度），由于這一現象和結晶的融解相類似，故又稱融點或融解溫度。因此Tm是指消光值上升到zui大消光值一半時的溫度。 

5、影響Tm值的因素：Tm不是一個固定的數值，它與很多因素有關： pH、離子強度。隨著溶劑內離子強度上升，Tm值也隨著增大。 DNA的堿基比例、DNA的均一性 ；在相同條件下，DNA內G-C配對含量高，其Tm值也高。 

6、DNA中的GC含量與Tm值關系： 

Tm = 69。3+0。41 × % （G+C） 

對于小于20bp的寡核苷酸，Tm=4（G+C）+2（A+T） 

實驗表明DNA分子中（G+C）克分子含量百分比的大小與Tm值的高低呈直線關系。