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  • 發布時間:2020-02-21 21:38 原文鏈接: 分子生物學常用試劑的配制(二)

      15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml)

      40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

      使用時再稀釋10倍。

      Tris-硼酸(TBE):5×濃貯存液(每升):54g Tris 堿

      27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

      使用時再稀釋10倍。

      堿性緩沖液:1×使用液(每升):5ml10mol/L NaOH

      2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

      Tris-甘氨酸:5×濃貯存液(每升):15.1g Tris 堿

      94g 甘氨酸(電泳級)(pH8.3)

      50ml 10%SDS(電泳級)

      2×SDS 凝膠加樣緩沖液

      100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)

      200mmol/L 二硫蘇糖醇(DTT)

      4%SDS(電泳級)

      0.2%溴酚藍

      20%甘油

      30%丙烯酰胺:

      將29g 丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中,加熱至37℃溶解之,補加

      水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾除菌查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中

      保存于室溫。

      10mol/L 乙酸銨:

      把770g 乙酸銨溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。

      1mol/LCaCl2:

      在200ml純水中(Milli-Q水或相當級別的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。

      2.5mol/LCaCl2:

      在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。

      1mol/L 二硫蘇糖醇(DTT):

      用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

      0.5mol/LEDTA(pH8.0):

      在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調節溶液的pH值至8.0,然后定容至1升,分裝后高壓滅菌備用。

      溴化乙錠(10mg/ml):

      在100ml水中加入1g 溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于室溫。

      1mol/LMgCl2:

      在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1升,分裝成小份并高壓滅菌備用。

      酚:氯仿:

      把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保存于4℃。

      磷酸緩沖鹽溶液(PBS):

      在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl調節溶液的pH 值至 7.4,加水定容至 1 升,高壓蒸汽滅菌 20min。保存于室溫。

      乙酸鉀溶液(用于堿裂解):

      在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。

      3mol/L 乙酸鈉(pH5.2 和 7.0):

      在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸鈉,用冰乙酸調節pH值至5.2或用稀乙酸調節pH至7.0,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。

      1mol/LTris:

      在800ml水中溶解121.1gTris堿,加入濃HCl調節pH至所需值。

      pH HCl

      7.4 70ml

      7.6 60ml

      8.0 42ml

      應使溶液冷至室溫后方可最后調定pH值,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。

      Tris 緩沖鹽溶液(TBS):

      在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿,加入0.015酚紅并用HCl調pH值至7.4,用蒸餾水定容至1升,分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡,于室溫保存。

      5mmol/LNH4Ac 溶液:

      秤取乙酸銨192.7g,加重蒸水250ml混勻,加重蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2滅菌20min。

      10mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)溶液:

      秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱貯存備用。

      10%十二烷基硫酸鈉(SDS):

      在900ml水中溶解100g 電泳級SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調節溶液的pH值至7.2,加入水定容至1L,分裝備用。


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