實驗方法原理
實驗材料 完整的人角膜
試劑、試劑盒 CMF-SalineG胰蛋白酶 EDTADMEM F-12 GASPDMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBSCMF GASP
儀器、耗材 手術刀或單刃安全刀片彎虹膜剪 11cm(4-3 8 in.)Jeweler’s懾子 10cm(4 in.)角膜剪 19mm刃 尖頭Colibri縫線鉗0.1 mm
實驗步驟
(a)用PBSA將角膜清洗3次，每次5 min。
(b)剪除殘留的鞏膜，結膜和虹膜。
(c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃過夜，輕微攪動。
(d)將加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃搖床搖30 min。
(e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。
(f)解剖顯微鏡下，小心去除小梁網，剝離內皮層并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。
(g)加入同等體積的DMEM/F-12/2FB并拍散細胞。
(h)離心400g,10 min,棄去上清。
(i)加人1 ml培養基，輕柔的重懸細胞并計數。