分離核仁實驗——分離核仁

肝臟

NKM

粗孔濾紙Teflon-玻璃勻漿器

1. 制備溶液：

NKM：0.13 mol/L NaCl，5 mmol/L KCl，8 mmol/L MgCl₂

0.34 mol/L 蔗糖，3 mmol/L MgCl₂

2.3 mol/L 蔗糖，10 mmol/L MgCl₂

0.34 mol/L 蔗糖，0.05 mmol/L MgCl₂

0.88 mol/L 蔗糖

2. （可選）用冰冷的 NKM 溶液灌注肝臟。

3. 稱組織重量，用剃刀或剪刀切成非常小的碎塊，或者用組織壓擠器進行壓擠。

4. 每克組織加 10 倍體積的含 0.34 mol/L 蔗糖和 3 mmol/L MgCl₂ 的溶液進行勻漿破碎細胞。

5. 勻漿通過 4 層粗孔濾紙以去除結締組織。

6. 4℃，500 g 離心 10 分鐘。

7. 用緊密結合的 Teflon-玻璃勻漿器勻漿使細胞核粗品重懸浮于 10 倍體枳（每克起始組織）的含 2.3 mol/L 蔗糖，10 mmol/L MgCl₂ 的溶液中。

8. 40000 g 離心 1 小時沉淀細胞核。

9. (可選）溫和地將細胞核沉淀重懸浮于 0.5 倍體積的含 0.34 mol/L 蔗糖，0.25% (w/v) Triton X-100 和 5 mmol/L MgCl₂ 的溶液中，500 g 離心 10 分鐘得到沉淀。

10. 將細胞核重懸浮于 0.16 倍體積的含 0.34 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl₂的溶液中。

11. 超聲處理細胞核懸液 4 次，每次大約 10 秒鐘。

12. 在超聲處理過的細胞核下面加一層含 0.88 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl₂ 的溶液，2000 g 離心 30 分鐘。

13. 收集核仁沉淀。