1、用DNase I處理雙鏈DNA，使之隨機產生單鏈斷裂。
2、DNA聚合酶I的5‘-3’外切酶活性從斷裂處5‘除去一個核苷酸，同時5‘-3'聚合酶活性將一個放射性核素標記的單核苷酸引入到斷裂的3'端。
3、反應重復進行，結果標記的核苷酸代替了原來的核苷酸殘基，形成了放射性的DNA分子。
