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  • 發布時間:2020-06-29 19:39 原文鏈接: 切向流超濾(TFF)的原理、特點及其應用

    切向流超濾(TFF)能快捷、高效地進行生物分子的分離與純化處理;可用于低至10毫升、高達數千升樣品溶液的濃縮和脫鹽處理;也可以用于不同大小生物分子的分離、細胞懸液收集、以及發酵液和細胞裂解液的澄清。

    為什么要使用切向流超濾

    ● 易于裝配,操作簡單-用管路和少許管路配件,簡單地連接切向流超濾裝置、泵以及壓力表,向儲槽中加入樣品,即可開始工作。

    ● 快捷高效-對比透析,裝配更輕松,處理速度快;對比離心濃縮裝置或攪拌式超濾裝置,可在更短的時間內獲得更高濃度。

    ● 僅需在同一系統中執行兩步操作-在同一系統中完成樣品的濃縮和滲濾處理,節約時間并避免損失產物。

    ● 工藝和縮放-由于結構材料與平板式超濾器流體通路,實驗室規模下的條件可以應用于生產規模的應用中。處理低至10mL、或高達千升體積的樣品,均可提供對應的切向流超濾裝置。成本低廉-切向流超濾裝置與平板式超濾器經清洗后可再次使用,也可在單次應用后廢棄。可執行簡單的完整性測試,檢驗濾膜和密封的完整性。

    切向流超濾的原理?如何分離生物分子

    切向流(也稱為“錯流”)超濾中,泵推動流體通過濾膜表面,沖刷去除其上截留的分子,從而使濾膜表面的積垢程度降至最低。在滲余物流體中產生緊靠濾膜的壓力,使溶質和小分子通過濾膜。如此方能完成過濾。利用細分篩網分離沙子與鵝卵石的模擬實驗,有助于理解切向流超濾的機理:篩網眼象征濾膜上的孔隙,而沙子與鵝卵石象征待分離的分子,在直流過濾中,沙子-鵝卵石混合物被迫向著篩網眼方向移動,隨著一些較小的砂粒通過篩網眼落下,在篩網表面形成以個鵝卵石層,阻礙頂部砂粒向篩網方向移動并通過篩網眼(圖1),在直流過濾中,增加壓力,僅能對混合物施加壓力,而無助于分離的促進;相比之下,在切向流超濾模式中,通過混合物的再循環防止限制層的形成,此再循環類似于:振動以去除阻塞篩網眼的鵝卵石,使得位于混合物頂部的砂粒落下并通過篩網眼。因此,利用切向流超濾進行生物分子分離,效率更高,濃縮或洗濾速度更為快捷。

    圖 1

    利用細分篩網分離沙子與鵝卵石

    (A)對混合物施加直接的壓力,使得底部砂粒落下;在篩網表面形成一個鵝卵石層,阻礙頂部砂粒向篩網方向移動并通過篩網。(B)振動篩網,破壞位于混合物底部的積聚鵝卵石層,使完全分離得以進行;切向流過濾中,進科流的錯流動力學作用,就相當于此例中的振動。

    切向流超濾的主要應用

    切向流超濾主要應用于:濃縮、洗濾(脫鹽及緩沖液置換)以及利用尺寸大小分離生物分子。此外,也可用于發酵液或細胞培養液中細胞及細胞碎片的去除、澄清。

    濾膜選擇

    Pall Life Science 提供多種類型的濾膜,以卓越性能和穩定性應對分子分離中的挑戰。Pall公司產品的顯著特征源于這些通用濾膜:

    超濾濾膜

     

    基于孔徑大小原理,利用濾膜,超濾可以分離特別小的顆粒和溶解的分子。在任何類型的裝置中,超濾濾膜的性能均決定于其形態。超濾濾膜具有不對稱結構(請參見上面的圖片),使得大于濾膜截留分子量的顆粒在濾膜表面受到截留,同時允許較小的物質通過濾膜下部結構。如果濾膜表面極其平滑,生物分子和病毒的截留產量將會提升。由于濾膜的下部結構,顆粒被迅速轉移、離開超濾膜分層,并防止濾膜積垢。

    超濾膜包流道的選擇

    網狀流道

    在此網狀流道配置中,篩網在濾出物流體中制造柔和的湍流,最大程度的減輕了濾膜積垢。網狀流道已經應用于濾過0.2μm級溶液(不含能阻塞篩網的顆粒物質或聚合體)。

    架空篩網流道

    在回流通路中,懸浮篩網流體通路配置具有更開放的結構,處理粘性的或顆粒物質密集的溶液時,性能表現較佳。

    網狀流道:對不含顆粒的蛋白質溶液進行優化處理

    架空流道:對于輕度到中度顆粒的溶液選擇架空流道

    根據起始樣品體積,確定適當產品

    選擇合適的額定截留分子量

    依據超濾的目標,選擇的濾膜孔徑通常要比需要保留在溶液中的相關分子小3至6倍,同時比溶液中一種分子大3至6倍,以保證這種分子能通過濾膜。


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