利用安捷倫SampliQ SCX 固相萃取柱和液相色譜/串聯質譜聯用檢測豬肉中的β2-激動劑
利用安捷倫SampliQ SCX 固相萃取柱和液相色譜/串聯質譜聯用檢測豬肉中的β2-激動劑
應用報告/食品安全
作者: Chenhao Zhai 安捷倫科技有限公司
中國上海外高橋保稅區，英倫路412 號 上海，200131 中國
Jianzhong Li and Yue Song 安捷倫科技有限公司
福州路318 號, 高騰大廈11 樓 上海200001 中國
摘要
本應用報告開發并驗證了一種同時檢測四種β2-激動劑殘留物的方法，包括特布他林、
沙丁胺醇、克侖特羅和福莫特羅。分析物經過液-液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)純化后，
由正離子多反應監測模式下的液相色譜耦合電噴霧串聯質譜(LC-ESI-MS/MS)進行定量。
該方法為檢測豬肉中四種β2-激動劑提供了亞ng/g 水平的檢測限（LOD），以及0.25 至5 ng/g 的動態校準范圍。總回收率為78%至101%, 相對標準偏差(RSD)為1.8%至7.2%。
前言
β2-激動劑是廣泛應用于豬肉生產中的一種非法生長促進劑。最近發生的中毒事件都是因為豬肉中含有高水平的β-激動劑（克侖特羅）。本應用報告采用了安捷倫公司新推出的固相萃取（SPE）產品來提取和濃縮豬肉中的β-激動劑，并采用LC-MS/MS
進行分析。表1 給出了四種β-激動劑化合物的名稱和結構。
表1. 本研究中采用的β2-激動劑化合物
實驗
試劑及藥品
所有試劑都是質譜純級、高效液相純級或分析純級。
乙腈和水由Scharlau 公司提供。乙酸乙酯、異丙醇由Fisher 公司提供。標準物均采購自國家藥品生物制品檢定所（NICPBP）。 豬肉則由本地市場采購。 以甲醇配制單個標準溶液（1.0 mg/mL），并在4 °C 下冷藏。
以甲醇-水(10:90) 配制合并工作溶液（10 μg/mL），并在4 °C 下冷藏。添加溶液應每周配制, 以適當稀釋合并工作溶液來制備。
設備與材料
安捷倫1200 高效液相色譜系統
安捷倫6460 三重四極桿液相色譜-質譜/質譜聯用系統
安捷倫SamliQ SCX 聚合物柱，50×3 mL 管，60 mg（部件號：5982-3236）
安捷倫ZORBAX Eclipse Plus C18 色譜柱，50 × 2.1 mm, 1.8 μm (部件號: 959741-906)
安捷倫真空歧管處理盒(部件號: 5982-9120)
樣品制備
液-液提取
于15mL 帶蓋聚丙烯管中稱取2 g 豬肉（精確至±0.01
g）。加入 8 mL 0.2M 的乙酸鈉（pH 值5.2）溶液，并渦旋以混合均勻。然后加入100 μL β-葡萄糖醛酸酶（1000
U/mL）并渦旋混合2 分鐘。樣品在37 °C 下水解16 小時。
水解產物經震動處理15 分鐘后，在離心機中用4000rpm 的速度離心分離10 分鐘。取4 mL 上層清液至另一離心管中，加入5 mL
0.1M 高氯酸溶液并調節pH 值至1 ± 0.3，再在離心機中以 4000 rpm 的速度離心分離10 分鐘。將上層清液移至另一試管中，用10M 氫氧化鈉溶液調節其pH 值至11。
于樣品試管中分別添加10
mL 飽和氯化鈉溶液和異丙醇-乙酸乙酯（60:40）混合液，并震動處理5 分鐘。以4000 rpm 離心分離5 分鐘后,
將有機層仔細轉移至另一離心管中。將異丙醇-乙酸乙酯混合液的添加、震動處理、離心分離和轉移有機液層的過程重復兩次，并將所有上清液合并。
樣品于40 °C 以氮氣吹干，并將殘留物復溶于5 mL 0.2M 的乙酸鈉（pH 值5.2）溶液中。該樣品將用于固相萃取純化。