利用篩網的機械分離法

生長培養基 鑷子 篩網 皮氏培養皿 手術刀 一次性塑料注射器 培養瓶

1. 清洗后切割組織（見方案 12. 5 的步驟 1 和步驟 2），將組織切碎為 3~5 mm³ 大小，每次取幾塊組織塊放在孔徑 1 mm 的不銹鋼或聚丙烯篩網（篩網或孔徑 100 μm~20 μm 的一系列篩網，或 Falcon 的細胞濾器）上，網置于 9 cm 皮氏培養皿中或離心管中。





2. 用注射器（一次性塑料注射器，2 ml 或 5 ml）的芯輕輕加壓使組織通過網孔進入培養基，吸取培養基（生長培養基，如：DMEM/F12，含10 % 胎牛血清）吹過篩網將細胞沖下。

3. 吸取分離的組織加入 100 μm 孔徑的篩網，重復步驟 2。

4. 此時獲得的細胞懸液可稀釋接種，若為了得到單細胞懸液也可進一步通過 20 μm 的篩網。通常對細胞懸液分離程度越高剪切力越大，存活率越低。

5. 用培養基將細胞懸液稀釋至 2×10⁵ /ml、1×10⁶ /ml 或 2×10⁶ /ml，接種于培養瓶。