利用ConcertPlant試劑從植物組織中純化RNA實驗

植物組織

Concert Plant RNA試劑NaCl氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水

一、材料

1.緩沖液、溶液和試劑

ConcertPlantRNA試劑(Invitrogen)，4°C預冷

NaCl,5mol/L(無RNA酶）

氯仿

異丙醇

乙醇，75%,用DEPC處理過的水配置

DEPC處理過的水

2.細胞和組織

適宜的植物組織（見二、方法中1），液氮凍后磨細

二、方法

1.向不超過0.lg研磨過的植物材料中加0.5ml冷的（4°C) Concert Plant RNA試劑。輕微振蕩混合至樣品重懸于試劑中。

2.室溫下水平放置管子溫育5min。

3.12000g離心2min以移去殘渣。

4.將上清液轉移到無RNA酶的新管中，并加0.1ml5mol/l的NaCl。在實驗臺上輕敲管子以混合。

5.加0.3ml氯仿，將管顛倒數次以混合。

6.4°C下12000g離心l0min。

7.將液相轉移到無RNA酶的新管中。加等體積異丙醇至液相中。將管顛倒數次以混

合。室溫下溫育10min。

8. 4°C下12000g離心樣品10min。

9.小心移棄上清液，避免擾動沉降物。

10.將lml75%乙酵加到沉降物中。室溫下12000g離心lmin。

11.移棄上清液，小心避免擾動沉降物。短時離心并吸去所有殘留液體。

12.將沉降物再溶解于10~30ulDEPC處理過的水中。如看到任何泥濁，則在室溫下

12000g離心溶液1min。將上清液轉移到無RNA酶的新管中，儲存于-70°C。