不同秒數的膜對反應有什么影響呢?
首先,我們分析一下液體在膜上的運動過程. 一張長度為4cm的膜, 每隔1cm做一個標記,
當液體運動過標記處時記錄時間點. 那么你將會發現液體在膜上的運動是呈減速前行的. 而兩張不同秒數的膜(例如135s,
180s)在同一時間標記點處的運動速度不同.這個試驗用清水做不好觀察,可以考慮用色素水溶液,非常明顯.
那么從這個試驗可以看出,在通過同一T線噴點位置時, 金溶液通過的速度是快速膜>慢速膜. 那么通過速度越快和包被在T線的物質反應時間也就越短,
讀數快, 那么靈敏度也就越低. 反之, 反應時間長, 讀數慢, 也就靈敏度高. 同時還有一個問題是, 反應時間越長,
發生非特異性結合的可能性就越大, 所以過長時間的反應不一定就能夠真正的提升靈敏度. 所以這里就有一個讀數時間/反應靈敏度/非特異性結合的均衡.
其實我們并沒有那么多選擇.
經過使用實踐, 各供應商一般都只提供兩個型號, 就是135s和180s.
雖然看到有些廠家的產品目錄上型號種類繁多,但這兩個型號的定貨量就占了95%以上, 其他型號供貨上也就遠不如這兩個型號來得順利.
135s一般用在雙抗體夾心法, 180s一般用在競爭法. 你所要做的是,先選擇其中的一個型號, 然后比較不同供應商同一個型號的差異,
由于前面說的添加配方與你的試驗條件配合的不同,這個差異可能大也可能小. 具體要根據試驗結果來確定最后的選擇.
我個人不建議地毯式的測試不同規格/不同廠家的膜, 這樣成本高, 成功的幾率也小.
四.膜的質控方式
本節適合用膜量較大的公司用戶參考.對于一卷膜可以用上幾個月的用戶來說, 廠家的質控標準已經完全能滿足你的要求,而不需要自己再做相關的質控.
膜的質控雖屬于原輔料QC職能, 但由于其專業性強, 一般都由小樣調試人員來執行. 膜入原料庫后需要進行如下檢驗工作:
1. 查收COA
在購買時, 供應商會隨產品為每個lot的膜提供一張紙質的出廠質量證書, 該證書被稱為COA. 如果你已經購買某一批次的膜, 而沒有索取相應的證書, 如果有需要可提供批號向廠家要求補發. 其實在很多行業都有廠商為自己的產品附上COA的習慣.
COA一般只提供給大客戶, 對小客戶是沒有意義的.
其內容主要是廠家在產品出廠時做過一些測試的羅列. 作用可以理解為質量憑證和測試數據參考.
2. 檢查物理性能
膜的物理性能主要是2個參數, 膜厚度和寬度. 長度不需要檢測. 使用中可以關注長度上是否有斷面重接現象, 斷面多費料則多, 少數發生.
厚度, 由螺旋測微尺,選擇幾個測量點檢測后算平均. 膜生產的必測參數. 主要表現為厚度不均勻影響生物原料在膜上的擴散性能, 點出來的C/T線寬窄不一. 另外也影響爬速.
寬度, 普通直尺測量.
物理性能一般都不會有什么大問題. 畢竟檢測標準客觀, 易把握. 沒有條件執行的廠家可省略.
3. 跑水性能
樣本采用含有有色食用色素的水溶液, 目的是容易觀測. 需制作一個簡易支架.
操作: 注入足夠溶液到下部槽內, 將不同批次膜每隔1cm做一次標記(總長大于4cm)并放到傾斜支架, 整個支架下端放入溶液槽, 膜開始吸液, 計時. 記錄每個標記處的通過時刻, 并與對照組比較.
跑板時, 理論上溶液呈水平線形式上吸, 觀測是否有波浪傾斜或包圍潤濕等反常現象.
4. 點樣測試
C/T線出線時間, 其他試驗條件相同情況下, 記錄和比較C/T線出現時間是否與對照有差異.
靈敏度, 比較不同樣本濃度情況下, T線的變化是否和對照組同. 一般每批次膜取前端一段用來測試即可. 由于制造過程的不均一性, 不同批號的靈敏度會有一定差異, 當大批量使用時, 這種差異影響是非常大的, 那么就要按照靈敏度表現將不同批號的膜進行分類. 在膜的STOCK中要能夠輕易的分辨出來. 當進入后期生產調用時, 就能根據這些分類, 按照訂單要求取用不同批號的膜, 或者用強靈敏度的原料和差靈敏度的膜來搭配.
關于膜的批內差.
批內差是肯定存在的,只是差距大小的問題,依據一般的測試條件是很困難獲得詳細的數值,因為你不可能對每一卷膜的每一段都做詳細的測試.
減小膜批內差的最有效方法是不購入邊緣膜帶.
前面說過膜的生產方式,生產出的半成品是寬幅很大的一個膜面,要通過截面裁切才能獲得25mm或者20mm的寬度.那么就有中間部分,和邊緣部分之分.越靠近中間部分,膜的均勻性越好,邊緣部分則相對要差,就造成了批內差.
一般可以通過COA獲得具體位置信息,例如MILLIPORE就在切割后用字母A,B,C……來表示切出的窄膜在寬幅膜中的位置.
如果是試用某個型號的膜小樣, 還需要在以上檢測后加入膜加速老化試驗. 包括膜單獨的老化試驗和點好膜后產品的老化試驗, 具體試驗方法請參看我以前寫的研發思路一文.
五.膜的深入探討和應用技巧
從本節開始,我們開始對膜進行深入討論和談一些應用技巧.
1. 蛋白與膜的結合原理
蛋白與膜的結合原理, 已知的結合力包括疏水作用力\H鍵\靜電作用力等,確切的結合原理并不明確,主要靠假說來支撐.主要有兩種假說:
1) 首先兩者靠靜電作用力結合, 然后靠H鍵和疏水作用來維持長時間結合.
2) 首先兩者靠疏水作用結合, 然后靠靜電作用來維持長時間結合.
兩條假說, 都表明其結合過程分為兩步, 首先結合和后面長時間結合.由于結合原理的不明確性, 導致在這方面的工作非常依賴實踐經驗.