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  • 發布時間:2020-09-14 23:19 原文鏈接: 制備細胞裂解液

    實驗流程:

    1. 收集胰蛋白酶消化的細胞并離心,用PBS清洗。

    2. 用100μl 裂解緩沖液冰浴溶解沉淀10min(每500000個細胞20μl裂解緩沖液)。

    3. 10000rpm,4°C離心10min,取上清轉移至新管。

    4. 用考馬斯亮藍法檢測蛋白質濃度。

    5. 用裂解緩沖液將溶液濃度調到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80°C儲存。

    6. 按照1:1體積比混合2×樣品緩沖液,煮沸5min后,室溫放置5min。

    7. 短時離心后點樣電泳檢測。

    溶液準備:

    裂解緩沖液:
    0.15M NaCl, 5mM EDTA(pH 8.0), 1% Triton×100, 10mM Tris-Cl(pH 7.4); 使用前加 5mM DTT, 0.1mM PMSF 異丙醇和
    5mM ε-氨基己酸

    2×樣品緩沖液:
    130mM Tris-HCl(pH8.0), 20%(v/v)甘油, 4.6%(w/v)SDS, 0.02%溴酚藍, 2%DTT

    PBS(pH7.4):
    10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, 50mM NaCl, 2.7mM KCl

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