實驗方法原理 取出前列腺和處理標本（30 min），用膠原蛋白酶消化前列腺組織（1 h），收集單個細胞和小的細胞團（1 h）。接種細胞，培養至形成單層（7 d）。
實驗材料 胎牛血清或馬血清青霉素卡那霉素霍亂毒索地塞米松EGF羊催乳激素或鼠催乳激素胰島素部分精制的前列腺調理素或精制的前列腺調理素I型膠原蛋白酶大鼠
試劑、試劑盒 生長培養液鹽性培養液
儀器、耗材 Petri培養皿手術剪注射器和14-G插管25ml Erlenmeyer燒瓶金屬絲濾網50ml錐形塑料離心管尼龍濾網24孔塑料培養板振蕩水浴箱離心機血細胞計數板或Coulter計數器
實驗步驟
1. 在無菌條件下，取出理想的前列腺葉，放入滅菌過的 60 mm Petri 培養皿（玻璃或塑料的，直徑為 60 mm）。
2. 剪除前列腺葉的脂肪，然后稱重。
3. 加入 2 ml 膠原蛋白酶（675 U/ml，用含有 100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 卡那霉素的 MSS 配制）。
4. 用手術剪將前列腺葉剪成約 1 mm 大小的組織塊。組織塊應小，足夠通過 14-G 插管。
5. 用注射器和 14-G 插管將組織塊移于滅菌過的 25 ml Erlenmeyer 燒瓶，然后加入膠原蛋白酶，每 0.1 g 濕組織加入 1 ml。
6. 置于振蕩水浴箱，在 37°C 條件下孵育 1 h 。
7. 分 3 次用 14-G 插管吸出消化的細胞懸液，然后用孔徑為 1 mm 的金屬絲濾網（孔徑為1 mm，與 50 ml 錐形離心管配用）將細胞懸液濾入 50 ml 圓錐形塑料離心管，以除去碎片和未消化的組織。加入等量含有 5 % 胎牛血清或馬血清的 MSS，浸洗細胞懸液。
8. 在 4°C 條件下離心（100 g，5 min），收集細胞。
9. 用 5 ml 含有 5 % 血清的 MSS 混懸細胞，然后依次用孔徑為 250 μm 、150 μm、100 μm 和 40 μm 的尼龍濾網（與 50 ml 錐形離心管配用）過濾細胞懸液，并每次用 5 ml 含有 5 % 血清的 MSS 沖洗濾網。
10. 通過離心收集細胞，然后用 5 ml WAJC404 培養液混懸細胞。
11. 計數細胞，將細胞濃度調整至 4×106 個/ml。
12. 將細胞接種于 24 孔板，每孔（面積約為 2 cm2）接種 50 μl 細胞懸液（含有 2×105 個細胞）。每孔內有 1 ml WAJC404 培養液、10 ng/ml 霍亂毒素、1 μmol/L 地塞米松、10 ng/ml EGF、1 μg/ml 催乳激素、5 μg/ml 胰島素、10 ng/ml 前列腺調理素、100 U/m 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素。可按 McKeehan 等 [1984] 以及 Chaproniere 和 McKeehan [1986] 敘述的方法替代部分精制的前列腺調理素。
13. 在 95 % 空氣和 5 % CO2 的濕潤環境和 37°C 條件下培養。第 3 天和第 5 天換液。第 7 天細胞可能接近單層。