實驗概要
本實驗把傳統的四種佐劑組成了一種復合物，形成了一種新型佐劑，然后再用這種新型佐劑與前纖維蛋白結合形成疫苗，從體重增加量和糞便卵囊排出量，腸道病變積分，以及重組前纖維蛋白抗體反應情況，淋巴細胞增殖，細胞因子mRNA的量化水平等方面來評價該疫苗的保護效力。
實驗原理
通過原核表達系統對堆型艾美耳球蟲的前纖維蛋白進行了原核表達，收集純化后與新型的QuilA 佐劑結合形成一種新的亞單位疫苗，通過動物實驗可以來評價這種新型疫苗的免疫保護性。
主要試劑
Quil A，Cholesterol，DDA，Carbopol，TRIzol，DNase I，WST-8 T4DNA連接酶，限制性內切酶，質粒小提試劑盒，DNA膠回收試劑盒
主要設備
熒光定量PCR儀，搖床，伯樂電泳儀，臺式高速冷凍離心機
實驗材料
雞：一日齡的小公雞
球蟲：堆型艾美耳球蟲
細菌：DH5α大腸桿菌
質粒：pMAL plasmid
實驗步驟
1. 重組前纖維蛋白的表達和提純：從堆型艾美耳球蟲的的cDNA文庫中克隆出前纖維蛋白基因，其全長為1086bp，再將其亞克隆到pMAL質粒中，再將構建好的質粒轉化到DH5α感受態細胞中，用1.0mM的IPTG在37℃條件下誘導表達3小時，離心收集菌體，在冰上破碎菌體，進行SDS-PAGE及Western blotting 對蛋白進行鑒定。
2. 用新型的重組前纖維蛋白疫苗去免疫，然后進行感染。其中新型佐劑的組成如下：12.0 ug/ml of Quil A，12.0ug/ml of cholesterol，0.6ug/ml of DDA。首免在一日齡，二免在一周齡且在相同部位進行。
3. 攻蟲及體重增加量和糞便卵囊排出量的測定。在二免7天后用每只雞10000個卵囊的劑量來感染雞。感染當天和感染后9天分別進行稱重。在感染后第6天到第9天收集糞便對卵囊進行計數。
4. 重組前纖維蛋白抗體反應的測定。二免后第7天每組殺4只雞取血，分離血清，用ELISA 檢測特異性抗體的含量。
5. 腸道病變積分。感染后第9天每組取5只雞進行盲腸病變計分，每只雞盲腸由三個不同的人分別進行計分，然后取平均值。
6. 淋巴細胞增殖。二免后7天每組取4只雞采外周血，將血細胞加到指定的培養基里使得細胞濃度為5.0×106/ml，然后在包含10ug/ml前纖維蛋白的96孔板中41℃，5%CO2的條件下孵育48小時，最后分析其結果。
7. 細胞因子mRNA的量化水平。二免后7天取沒感染雞的十二指腸，將其將其切成幾段，用含有100U/ml鏈霉素的Hank’s洗三遍，洗完后用外科手術剪刮掉粘膜層，用TRIzol提取總RNA, 然后將RNA反轉錄成cDNA,再找到各種所測細胞因子的引物序列，進行熒光定量PCR。所測的細胞因子引物序列如下圖：
8. 數據分析。用SPSS 15.0軟件進行數據分析。