一、材料準備
1. 動物：裸鼠9 只，6～8周齡，雄性；C57小鼠24 只，6～8 周齡，雄性；動物均為自由飲水采食。
2. 細胞：MDA-MB-231人乳腺癌細胞系，使用熒光素酶基因標記。方法：用熒光素酶報告基因標記的質粒轉染人乳腺癌細胞， 共轉染的還有選擇性標記基因，從而保證轉染 細胞的穩定性，形成表達熒光素酶的腫瘤細胞株；B16 黑色素瘤細胞。
二、實驗步驟
1. 紫杉醇混合膠束的制備
（1）將適量紫杉醇溶解在少量無水乙醇和丙二醇的混合溶劑中.
（2） 加入適當比例的磷脂和表面活性劑A 進行充分混合，制得穩定的紫杉醇混合膠束前體制劑，載藥濃度為6 g/L。
（3）臨用時按劑量加入生理鹽水中稀釋、搖勻后即可使用。制劑體系的粒徑大小與分布特征采用動態激光光散射粒度儀檢測。
2. MDA-MB-231人乳腺癌細胞荷瘤鼠模型的建立
（1）培養熒光素酶基因標記的MDA-MB-231人乳腺癌細胞系，使用DMEM 培養基（添加 10%胎牛血清），37 ℃、5% CO2 培養箱中培養，每3天傳代1次。
（2）待細胞密度為80%～90%、細胞總量達到實驗所需要求時，使用胰酶消化，收集于PBS溶液重懸。
（3）如有需要，在細胞培養一定時間后，應使用抗生素 Zeocin進行抗性篩選， 保證熒光素酶基因的表達量足夠。
（4）收集細胞，使用PBS稀釋至細胞數1.5×108/mL，接種于裸鼠腋下，每只裸鼠的接種量為0.1 mL 。
3. 動物活體成像檢測
（1）接種后將裸鼠隨機分為3組，分別為生理鹽水組、紫杉醇注射液組、紫杉醇混合膠束制劑組，每組3只。
（2）腫瘤接種后第8天開始給藥，劑量為 15 mg/kg，每3天腹腔注射給藥1次。從第1次給藥開始，每7天進行1次活體成像檢測。
（3）采用戊巴比妥對裸鼠進行麻醉（劑量為 60~80 mg/kg）， 10~15 min 后裸鼠即處于昏迷狀態。
（4）腹腔注射熒光素底物（150 mg/kg），發射光波長在540~600 nm。注射后15~35 min 觀測，為熒光強度最高的時段。
4. 活體成像儀參數設置
（1）將2~3只小鼠并排放入暗室中，熒光素酶與底物反應后產生的發光不需要激發，可以自發光，只需調整CCD相機的曝光時間拍照即可。
（2） 選用3 min 曝光時間，使用軟件Kodak MI In Vivo Fx Pro處理圖像，增加偽彩。
（3）觀察腫瘤區域的影像，并根據活體成像圖片測量圖中腫瘤大小，進行統計分析。
5. 在整個實驗過程中，給藥的同時監測裸鼠體重，采用游標卡尺測量腫瘤大小，運用公式V = π?（6ab2）-1計算腫瘤體積， 繪制腫瘤生長曲線，并與活體成像結果進行比較，考察紫杉醇制劑的抑瘤效果以及利用活體成像方法評價藥物抑瘤作用的可行性和準確 性。
6. 生存周期的測定
（1）在活體成像實驗的基礎上，研究不同紫杉醇制劑對B16黑色素瘤C57小鼠的生存期的影響。
（2）首先培養B16黑色素瘤細胞，以PBS調整細胞數至5×106/mL。采用右后肢皮下注射，每只C57小鼠注射0.1 mL，即細胞數為5×105。
（3）接種后常溫下正常飲食飼養，于腫瘤接種后第6天，腫瘤直徑達0.2 cm 左右時，隨機將C57小鼠分成3組，分別為生理鹽水組、Taxol 組、PMM 組，每組8只。
（4）采取腹腔注射給藥法，每隔3天給藥1次，給藥劑量為15 mg/kg。
（5）每天觀察小鼠，以天為單位記錄死亡時間并繪制生存周期曲線，并計算平均生存周期。 7. 統計學方法所有統計的實驗數據以x ± s表示，采用SPSS軟件對比較的樣本進行 t 檢驗。
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