動物染色體標本的制備

一、實驗目的
1. 了解染色體標本制備的基本原理
2. 掌握滴片法制備染色體標本的一般步驟

二、實驗原理
每一物種的細胞一般都具有一定數目、形狀和大小的染色體，在秋水仙素的作用下可使分裂細胞阻斷在中期，此時染色體形態最典型，然后通過低滲、固定、染色等步驟，便可在顯微鏡下呈現出其形態。

三、實驗用品
器具：顯微鏡、培養皿、手術剪、鑷子、冷凍載片、滴管
試劑：秋水仙素、生理鹽水、甲醇、冰醋酸、低滲液、PH6.8磷酸緩沖液、Giemsa染色液
材料：蟾蜍

四、實驗方法步驟
1. 前處理 實驗前3－4小時，按每克體重3ug劑量給蟾蜍的腹腔注射秋水仙素；
2. 取材 打開蟾蜍腹腔，截取1－2cm長的一段小腸（以十二直腸為好），用見到剖開成片狀，在生理鹽水中洗凈；
3. 低滲 將洗凈的小腸投入到盛有5mL低滲液的小試管中，在37℃水浴下處理30分鐘以上；
4. 固定 棄去低滲液，加入新配制的甲醇（3）：冰乙酸（1）固定液約5ml，靜止固定40分鐘左右；
5. 解離 棄去固定液，加入約2ml60％的冰乙酸，輕輕搖動，使解離的細胞充分散開，5分鐘后棄去小腸，即得細胞懸浮液；
6. 滴片 吸取少許細胞懸浮液，在適當的高度滴3－4滴于冰冷的載片上，迅速吹斜氣；
7. 干燥 滴片自然風干或吹風機吹干；
8. 染色 在載片上滴十滴磷酸緩沖液，再滴一滴Giemsa染液，橡皮球輕輕吹均勻，染色30分鐘左右；
9. 觀察 吹干后在顯微鏡下觀察。