動物源食品中四環素類獸藥多殘留測定實驗

動物肝臟 腎臟 肌肉組織 水產品 牛奶

聚丙烯 乙二胺四乙酸二鈉 甲醇-水 甲醇-乙酸乙酯 乙腈 三氟乙酸

聚丙烯離心管 固相萃取柱 高效液相色譜 串聯質譜儀

1.  提取
 
動物肝臟、腎臟、肌肉組織、水產品：稱取均質試樣5 g（精確到0.01 g），置于50 mL聚丙烯離心管中，分別用約20 mL、20 mL、1O mL、0.1  mol/L EDTA-Mcllvaine緩沖溶液（0.1 mol/L。稱取60.5 g乙二胺四乙酸二鈉放入1625mL Mcllvaine緩沖溶液中，使其溶解，搖勻）低溫超聲提取三次，3000 r/min，5 min離心（溫度低于15 ℃），合并上清液（注意控制總提取液的體積不超過50 mL），并定容至50 mL，混合，5000 r/min，離心10 min（溫度低于15 ℃），過濾，待凈化。
 
牛奶：稱取混勻試樣5 g（精確到0.01 g），置于50 mL聚丙烯離心管中，用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine緩沖溶液溶解并定容至50 mL，旋渦混合1 min，低溫超聲10 min，冷卻至4 ℃， 5000 r/min，離心10 min （溫度低于15 ℃），過濾，待 凈化。
 
2.  凈化
 
準確吸取10 mL提取液以1 滴/s的速度過Waters Oasis HLB （60 mg，3 mL）固相萃取柱，待上清液完全流出后，依次用5 mL水和5 mL甲醇-水（5 + 95）淋洗，棄去全部流出液。減壓抽干5 min，最后用10 mL甲醇-乙酸乙酯（10 + 90）洗脫。將洗脫液吹氮濃縮至干（溫度小于30 ℃），用1.0 mL標準稀釋液溶解殘渣，低溫超聲5 min，過0.45 um濾膜，供高效液相色譜/串聯質譜儀測定。
 
3.  5HPLC 測定條件
 
色譜柱：Inertsi1 C8-3，5 um，150  mm×2.1  mm；
 
流動相：甲醇，乙腈，0.01 mol/L三氟乙酸，洗脫梯度見表3-11（柱平衡時間5 min）；


 
流速：1.5 mL/min；
 
柱溫：30 ℃；
 
進樣量：30 uL。
 
4.  HPLC-MS/MS 測定條件
 
色譜柱：Inertsil C8-3，50 m，150 mm × 2.1 mm； 
 
流速：0.3 mL/ min；
 
柱溫：30 ℃；
 
進樣量：300 L；
 
流動相：甲醇 + 0.01 mol/L三氟乙酸。
 
離子化模式：ESI+ ；
 
質譜分辨率：單位分辨率；
 
霧化氣（NEB）：6.0 L/min；
 
氣簾氣（CUR）：10.0 L/min；
 
噴霧電壓（IS）：4500 V；
 
去溶劑溫度（TEM）：500 ℃；
 
去溶劑氣流：700 L/min；
 
碰撞氣（CAD）：6.0 L/min（氮氣）。